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ヒト熱ショック蛋白質Hsp40コシャペロンの構造生物学研究

人热休克蛋白Hsp40辅助伴侣的结构生物学研究

基本信息

批准号：
17659009
负责人：
佐藤能雅
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトの熱ショック蛋白質Heat Shock Protein 40(Hsp40)は,ガン細胞の温熱療法への耐性の獲得に関わる蛋白質であり,生合成された蛋白質のネーティブ構造へのHsp70による巻き戻し,会合や輸送への関与が細胞レベルで示されている。研究では,ヒトHsp40を発現,精製,結晶化し,三次元構造をX線結晶構造解析によって解明することを目的とした。Hsp40全長体を大腸菌株で発現させ,高純度に精製した。全長体からβ-トリプシンによってC末端側ドメインを切り出してC末端体を調製した。Hsp70の部分ペプチド鎖を調製し,部分ペプチド鎖とHsp40全長体およびC末端体との相互作用を調べた。これらの混合画分の結晶化も進めた。結晶化が困難な蛋白質の試料準備と結晶化操作の手法を精査して手順マニュアルを作成し,研究を展開した。全長体については,数種類の結晶を析出させることができた。しかし,いずれの結晶も微小で,結晶化条件を広範囲に探索してもサイズを改善することはできなかった。これは,全長体のN末端側がフレキシブルな構造を持つことに由来するものと考えられる。C末端体は,変性ルシフェラーゼを用いる性情解析から,全長体とHsp70シャペロンの巻き戻し反応を抑制することから,巻き戻しに重要な役割を担っている。C末端体のN末端はSer150で,分子量は21,000となった。結晶化条件の探索を行ない,様々な晶癖の結晶を得ることができた。さらに,部分ペプチドとC末端体の共結晶化により,種結晶法を用いて外形が良好な結晶を得た。これらはX線回折能が良好であったが,長周期の回折斑点が認められた。X線解析が可能な結晶なので,全長体,C末端体の結晶化と併せて,結晶化条件と回折実験の改善を引き続き行うこととしている。

Heat Shock Protein 40 (Hsp40), protein 40 (Hsp40), cell temperature, tolerance, protein synthesis, protein synthesis, protein synthesis, The purpose of this paper is to study the results of Hsp40 analysis, precision, crystallization, X-ray diffraction, X-ray analysis and analysis. The full-length strain of Hsp40 was detected in E. coli, and the strain with high concentration was fine. The full-length body is full-length, and the C-terminal is cut out of the C-terminal. The Hsp70 part is full-length Hsp40, the C-terminal body is interacting with each other. The results of the mixed drawing are crystallized and improved. Results the preparation of the crystallization method of protein preparation, the preparation of the crystallization method, the preparation of the crystallization method, the preparation of the protein material, the preparation of the crystallization method, the preparation of the crystallization method. A full-length system has been developed, and several kinds of systems have been precipitated. The crystal size of the crystal is very small, and the crystallization conditions of the crystal are very small, and the conditions of crystallization are very small. The full-length body is full-length, N-terminal, full-length, full-length and full-length. C-terminal body, sex and temperament analysis, full-length Hsp70 body, full-length body, anti-body, anti-inhibition, anti-inhibition and important service cutting. C-terminal "N-terminal" Ser150 ", molecular weight" 21000 ". Results the crystallization conditions were explored, and the crystallization conditions were obtained by the results of crystallization. Some of the terminal bodies were crystallized together, and the crystal method was used to show that the shape was good. The X-ray folds can be used in a good way, and the spots can be folded for a long period of time. X-ray analysis may lead to the crystallization of X-ray crystal, full-length and C-terminal, and the crystallization condition of X-ray analysis is to improve the effect of crystallization.