权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

可変型遺伝子トラップによる挿入突然変異マウス作製とそのカタログ化

使用可变基因陷阱创建插入突变小鼠并对它们进行编目

基本信息

批准号：
12024222
负责人：
荒木喜美
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12024222/
关键词：
Crel loxシステム挿入変異マウス胚性幹細胞遺伝子トラップ

项目摘要

我々は,単なる遺伝子破壊型の変異を作り出すだけではなく,トラップベクターのレポーター遺伝子を任意の遺伝子に置換できるようにするため,バクテリオファージP1由来のCre-loxシステムを応用し,組換え部位であるlox配列に変異を加えたものを用いることでES細胞でNDAを部位特異的に挿入させる方法を開発した。このCre-変異lox組換えシステムでは、lox配列の5'端3'端にそれぞれ変異を加えたlox71とlox66配列、中央部スペーサー領域に変異を加えたlox2272配列を組み合わせて用いる。このシステムをトラップベクターに用いることで、トラップされた遺伝子のプロモーターのコントロール下に別の遺伝子を発現させ、それをマウスで解析することができる。これら変異lox配列を用いた可変型遺伝子トラップベクターpU-17(intron-lox71-splice acceptor-beta geo-loxP-pA-lox2272-pSP73-lox511)を構築し、TT2ES細胞にエレクトロポレーションにより導入、トラップクローンの単離を行なった。現在までに合計767クローンを単離した。これらのクローンについて、挿入パターンをPCRおよびサザンブロットにより解析した結果、約半数のクローンが1コピーの挿入でlox配列を保持していることがわかった。それらのクローンを用い、順次キメラマウスの作製し変異マウスの系統樹立も行なっている。キメラマウスは実体顕微鏡下で行なえるモルラ胚とのアグリゲーション法で作製しており、現在までに34系統の変異マウスラインを樹立した。また、トラップされた遺伝子の解析も5'RACE法により進めている。まだ解析数は10クローン程度であるが、その手法は確立し、確実にRACE産物が得られるようになった。

We have developed a method for the site-specific insertion of ES cells into NDA by means of the following: 1. The first step is to change the type of DNA in a single cell, and 2. The second step is to change the type of DNA in a single cell. The Cre-lox group is composed of the 5'end and 3' end of the lox arrangement. The lox71 and lox66 are arranged in the central part. The lox2272 is arranged in the central part. This is the first time that a person's name has been changed. This variable lox sequence can be used to construct TT2 ES cells. TT2 ES cells can be constructed by introducing and separating variable lox receptors (intron-lox71-splice acceptor-beta geo-loxP-pA-lox2272-pSP73-lox511). The total is 767. About half of the results of PCR and analysis were maintained. The system is set up in the following order: The system is controlled by the micro-mirror, and the system is set up by the micro-mirror. The 5'RACE method is used to analyze the contents of a file. The resolution number is 10, the method is established, and the RACE product is obtained.