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Cre-loxシステムを応用した遺伝子トラップによる発生関連遺伝子の単離と解析

使用 Cre-lox 系统使用基因陷阱分离和分析发育相关基因

基本信息

批准号：
09780686
负责人：
荒木喜美
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780686/
关键词：
ES細胞遺伝子トラップ Cre loxシステム Cre-eox システム

项目摘要

トラップベクター(pU-Hachi)を用いて現在まで109クローンを単離し、サザンブロットでトラップベクターの挿入パターンを調べたところ、約7割が1コピーのみの挿入であり、現在用いているエレクトロポレーションの条件がよいことが確認できた。この1コピーのみ挿入のクローンについて、未分化及び胚様体でのβ-geo遺伝子の発現を調べ、パターンにより分類を行った。その結果、まず、ほぼ全てのクローンでいずれかの時期に染色がみられ、このベクターでのトラップ効率は大変良いことが分かった。また、約5割のクローンは分化後に発現の上昇を示した。いくつかのクローンについては、ベクター挿入部位周辺のgenomicDNAの回収にも成功している。トラップベクター挿入時にプラスミドレスキューに用いるpUC部分が脱落してしまうクローンが4割以上も存在していた。そこで、これらのクローンに、新たなプラスミドをCre/lox部位特異的導入法を用いて導入した。この場合は、loxPの後のポリAシグナルを利用する形での導入を行ったので、導入効率は大変良く、良い場合にはほぼ100%、最も悪いものでも2割の挿入効率であった。現在までに17ラインのpU-Hachiトラップクローン由来のマウスを得ている。他のトラップベクター由来のマウスラインも合わせると、23ラインになる。そのうち、ホモ/ヘテロのgenotypingが出来ているものは13ラインあるが、胎生致死の表現型を示すものはうち8ラインであった。各ラインで、胎児期及び成体でのβ-geo遺伝子の発現パターンを解析しているところであるが、胎生期では全身が、成体では脳と心臓(特に心房)が染色されるものが多いようである。今までで、トラップされた遺伝子が明らかになったものとしては、CBP、CyclinB2、spl.crk、dynamin.Suilなどがある。

This is the most important thing in the world. (pU-Hachi), please do not know what to do. Please do not know if you are not allowed to do so. In the first part of this paper, we do not know if there is a problem in the development of β-geo genes in the undifferentiated, undifferentiated and undifferentiated embryos. The results, the results, the results and the results. After differentiation, about 5% of the cuttings showed signs of differentiation. Please tell me that you are successful when you go back to the genomicDNA site. Please make sure that there are some errors in the use of pUC when you enter the computer. The entry method for the special parts of the Cre/lox is to use the method of entering the parts. In the end, you can use the shape of the loxP to make use of the data to make sure that the rate is good, the rate is good, the rate is 100%, and the most efficient way is to cut the rate. Now, I don't know where it comes from. I don't know what to pU-Hachi. He told me that he didn't know where he was from, and that he didn't know where he was from. Please tell me that the genotyping is out of the box, and that the death of the fetus and the birth and death of the fetus are shown in the table. The fetal, fetal and adult β-geo babies were detected and analyzed. The whole body, fetal body, adult heart and atrium were stained. Today, please tell me what to do, CBP, CyclinB2, spl.crk, and dynamin.Suil.