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Cre-loxPシステムを用いた新しい遺伝子トラップベクターの開発

使用 Cre-loxP 系统开发新的基因捕获载体

基本信息

批准号：
07780660
负责人：
荒木喜美
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780660/
关键词：
Cre-loxP ES細胞遺伝子トラップ

项目摘要

1.トラップベクターの構築レポーター及びセレクションマーカーとしてβ-galactosidase/ネオマイシン耐性融合遺伝子を用いたトラップベクターpU-sanと、ヒトCD4遺伝子を用いた膜蛋白トラップベクターpMEMT2を構築した。両者ともベクター内にはloxP部位を持ち、Creによる組換えでプラスミドレスキューの際に不要な部分を欠落させることができるようになっている。2.トラップクローンの単離と解析pU-sanをES細胞に導入し、約120個のコロニーを単離した。各々のクローンを、未分化状態及び胚葉体に分化した状態で、X-gal染色によるlacZ遺伝子発現パターンを解析した。その結果、分化して発現の強くなるものが約30%、低下するものが約5%あり、これらは、分化に関係のある遺伝子をトラップしているものと期待された。3.Creのtransient expressionによる組換えシステムの確立従来一般的には、Creによる組換えの起こった細胞を選ぶために薬剤で選択を行っていた。しかし、今回作製したトラップベクターにはそのための遺伝子を組み込めなかったので、選択なしでどれだけ組換え体が得られるかを検討した。その結果、ほぼ50%の確立で組換え体を得ることができ、薬剤選択の必要はないことがわかった。4.膜蛋白トラップ法の条件検討この方法によるトラップの可能性の検討のため、まず、ヒトCD4遺伝子全長を発現するES細胞クローンを単離した。今後、この細胞を用いて細かい条件検討等を行う。

1. In this study, we used membrane proteins, β-galactosidase/ genes, endurance fusion genes, endurance fusion genes, pU-san genes, membrane proteins, membrane proteins, membrane proteins, In this case, you need to know that the loxP location is not available, and that the Cre system is responsible for the loss of the position. two。 There are approximately 120 pU-san ES cell inbound and approximately 120 remote remote quarantines. The undifferentiated, undifferentiated and differentiated embryos were detected by X-gal staining and lacZ staining. The results showed that the results of differentiation were 30%, 5% and 5% respectively, and those of differentiation and differentiation were about 30% and 5%, respectively. The 3.Cre transient expression system is responsible for making sure that the general information system and Cre system are required to make sure that you do not need to select the appropriate information. This time, this time, we need to know how to do this. This time, we need to make sure that we are in the middle of something. This time, we are going to make sure that the system is in good condition. Check the results and make sure that 50% of the results are correct, and that you select the necessary information. 4. The whole length of the whole cell of CD4 was detected by the whole length of the whole cell of ES, and the cell cycle was isolated. From now on, we will use the following words, such as conditions and so on.