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転写装置とmRNAプロセシング装置のクロストーク機構の解析

转录设备与mRNA加工设备之间的串扰机制分析

基本信息

批准号：
12028213
负责人：
広瀬豊
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028213/
关键词：
mRNA プロセシング転写

项目摘要

転写とmRNAプロセシングは、RNAポリメラーゼII最大サブユニットC-末端領域(CTD)とmRNAプロセシング因子のCTDリン酸化に依存した相互作用を介し、有機的に連携しながら進行している過程であることが明らかになって来ている。本研究は、転写装置とmRNAプロセッシング装置との間にどのような分子間相互作用のネットワークが存在し、転写反応及びmRNAプロセシング反応がどのように相互に関連し制御されているのかを明らかにする手がかりを得るために、リン酸化CTDに結合する新規蛋白質の同定とその機能解析を行うことを目的としている。これまでに、Far-western法及びGST-pull down法等によって、リン酸化CTDに結合する蛋白質として、ヒトの新規蛋白質PCIF1、既知のヒト蛋白質でペプチジルイソメラーゼ活性を有するPin1,mRNAスプライシング因子と考えられるFBP11及びHECTドメインを持ちユビキチンリガーゼ活性を有すると予想されるWWP1を同定した。これらの蛋白質が共通して持つWWドメインがリン酸化CTDとの結合に必須であること、更にPCIF1については、リン酸化RNAポリメラーゼIIとの細胞内会合を示唆する結果を得た。現在これらリン酸化CTD結合蛋白質の細胞内機能の検索を行っている。PCIF1及びPin1を各々数種のヒト培養細胞に於いて一過性に過剰発現させたところ、いくつかの転写因子の転写活性化ドメインに依存したレポーター遺伝子のトランス活性化が、PCIF1及びPin1の発現量に相関して強く抑制されることが観察された。PCIF1及びPin1が、リン酸化RNAポリメラーゼIIを標的とする新たな転写抑制因子として機能している可能性が考えられる。

mRNA transcription factors are dependent on the interaction between RNA transcription factors and C-terminal domain (CTD), and organic interactions are involved in the process of transcription. The present study is aimed at determining the identity and functional analysis of new proteins in the presence, absence, and interaction of mRNA and CTD. The Far-Western and GST-Pull-Down methods are used to determine the protein binding activity of CTD, PCIF1 and PCIF 1. These proteins are common to all but one of the most important components of protein binding, such as PCIF-1, RNA binding, and intracellular binding. Now, the intracellular function of CTD-binding proteins is undergoing a process of transformation. PCIF1 and PIN1 are transiently detected in cultured cells, and the activation of PCIF1 and PIN1 depends on the activation of PCIF1 and PIN1. PCIF1 and Pin1 are the targets for RNA amplification and the possibility of a new inhibitor function is examined.