リン酸化RNAポリメラーゼIIによるmRNAプロセシング過程の制御機構
磷酸化RNA聚合酶II对mRNA加工过程的控制机制
基本信息
- 批准号:15030217
- 负责人:
- 金额:$ 2.43万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2003
- 资助国家:日本
- 起止时间:2003 至 2004
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
RNAポリメラーゼII(RNAP II)最大サブユニットカルボキシル末端領域(CTD)は、RNAP IIによるRNA合成中にダイナミックなリン酸化を受けながら、RNAプロセシング因子の転写部位への集合・離散を制御するscaffoldとして機能している。私は、リン酸化CTDに特異的に結合する新規因子の同定と機能検索を通じ、転写とRNAプロセシングをカップルさせている分子機構にアプローチしている。これまでに、ヒト新規核蛋白質PCIF1、細胞周期調節因子プロリルイソメラーゼPin1など4種類のWWドメイン蛋白質をリン酸化CTD結合因子として独自に同定してきた。今年度は脊椎動物PCIF1の機能解析を中心に行い、以下の結果を得ることが出来た。(1)トリB細胞株DT40を用いたPCIF1遺伝子ノックアウトによる解析から、PCIF1の発現消失に伴いPin1の発現亢進が観察された。このことから両者の機能的な関連性、またはPCIF1がPin1発現の負の調節因子である可能性が示唆された。(2)ノックアウトDT40細胞と正常細胞を比較し、mRNA発現量が変化する遺伝子をディファレンシャルディスプレイによって検索し候補遺伝子を単離した。(3)ヒトPCIF1は細胞周期M期特異的にリン酸化を受ける。(4)CTD脱リン酸化酵素ヒトSCP1による試験管内CTD脱リン酸化反応は、PCIF1またはPin1によって強く抑制される。(5)ヒトPCIF1および酵母CTD脱リン酸化酵素Ssu72のヒトオルソローグ遺伝子産物のC-末端側に、TAP(タンデムアフィニティー精製)タグを融合させた蛋白質を発現誘導出来るヒト安定細胞株を樹立した。またTAPタグ精製法によって各々の因子を含む細胞内複合体の精製を行った。
RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II (RNAP II) maximum サ ブ ユ ニ ッ ト カ ル ボ キ シ ル terminal domain (CTD) は, RNAP II に よ る RNA synthesis に ダ イ ナ ミ ッ ク な リ ン acidification を by け な が ら, RNA プ ロ セ シ ン グ factor の planning write parts へ の collection, discrete を suppression す る scaffold と し て function し て い る. Private は, リ ン acidification CTD に specific に combining す る new rules factor の be と function 検 cable を じ, planning to write と RNA プ ロ セ シ ン グ を カ ッ プ ル さ せ て い る molecular institutions に ア プ ロ ー チ し て い る. こ れ ま で に, ヒ ト PCIF1 new rules on nuclear protein, cell cycle regulation factor プ ロ リ ル イ ソ メ ラ ー ゼ Pin1 な ど 4 kinds の WW ド メ イ ン protein を リ ン acidification CTD combination factor と し て に alone with fixed し て き た. This year, the <s:1> function analysis of the <s:1> of vertebrate PCIF1 を center を conducted を, and the following <s:1> results を obtained る る とが とが た. (1) ト リ B cell lines DT40 を with い た PCIF1 posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト に よ る parsing か ら, PCIF1 の 発 now disappear に with い Pin1 の 発 now hyperthyroidism が 観 examine さ れ た. こ の こ と か ら struck の function of な masato even sex, ま た は PCIF1 が Pin1 発 is の negative の adjustment factor で あ が る possibility in stopping さ れ た. (2) ノ ッ ク ア ウ ト DT40 と normal cells を し, mRNA 発 quantity が now - the す る posthumous son 伝 を デ ィ フ ァ レ ン シ ャ ル デ ィ ス プ レ イ に よ っ て 検 cable し alternate heritage 伝 son を 単 from し た. (3)ヒトPCIF1 にリ specific acidification of the M phase of the cell cycle を is inhibited by ける. (4) the CTD リ off ン acidification enzyme ヒ ト SCP1 に よ る test tube CTD リ off ン acidification anti 応 は, PCIF1 ま た は Pin1 に よ っ て strong く inhibit さ れ る. (5) ヒ ト PCIF1 お よ び yeast CTD リ off ン acidification enzyme Ssu72 の ヒ ト オ ル ソ ロ ー グ heritage 伝 zi chan の C - end side に, TAP (タ ン デ ム ア フ ィ ニ テ ィ ー refined) タ グ を fusion さ せ た protein を 発 induced out now る ヒ ト stable cell lines を set し た. Youdaoplaceholder0 TAPタグ refining method によって Each 々 <s:1> factor を containing む intracellular complex む refining を process った
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Y-X.Xu, et al.: "Pin1 modulates the structure and function of human RNA polymerase II"Genes & Development. 17. 2765-2776 (2003)
Y-X.Xu 等人:“Pin1 调节人类 RNA 聚合酶 II 的结构和功能”基因
- DOI:
- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
F.Hong, et al.: "PCIF1, a novel human WW domain-containing protein, interacts with the phosphorylated RNA polymerase II"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 301. 378-385 (2003)
F.Hong 等人:“PCIF1,一种新型人类 WW 结构域蛋白,与磷酸化 RNA 聚合酶 II 相互作用”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 301. 378-385 (2003)
- DOI:
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