アポトーシスにおけるスプライシング制御

细胞凋亡中的剪接控制

• 批准号: 13216041
• 负责人: 広瀬 豊
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216041/
• 关键词: アポトーシス; 選択的スプライシング; RNAポリメラーゼII; リン酸化

アポトーシスと選択的スプライシング制御機構との関連を検索するために、アポトーシス誘導に応じたアポトーシス関連遺伝子のアイソフォーム発現パターンの変化、及びそれに附随したスプライシング制御システムの変化、とりわけRNAポリメラーゼII(PolII)最大サブユニットC-末端領域(CTD)のリン酸化状態の変化を解析した。HeLa及び293Tヒト培養細胞に、アポトーシス誘導刺激としてエトポシド添加またはUV照射処理を行い、それに附随した複数のスプライシングバリアントを持つことが知られているアポトーシス関連遺伝子(Bcl-x、Caspase 2、Caspase 9、Mcl-1、Apaf-1)のアイソフォーム発現パターンの変化をRT-PCRにより経時的に解析した。同時に、CTDのリン酸化状態の変動を、部位特異的なリン酸化を認識するモノクローナル抗体を用いウエスタンブロットによって検出した。更にスプライシング因子及びCTDをリン酸化することが報告されているMAPKの発現の変化をウエスタンブロットによって検討した。調べたアポトーシス関連遺伝子のアイソフォーム発現パターンは、今回検討したアポトーシス誘導刺激によっては大きな変動を示さなかった。一方ある線量以上の紫外線照射によってCTDリン酸化の量的・質的変動が観察され、更にPolII最大サブユニットの選択的な分解が観察された。一方エトポシド処理によってはPolIIの特異的分解は観察されなかった。現在、アポトーシス誘導時にApaf-1遺伝子のプロモーター近傍及び選択的スプライシングを受けるエクソン近傍で転写/プロセシングに関与している因子及びCTDのリン酸化状態の変化を、クロマチン免疫沈降法(ChIP)によって検索している。

The analysis of the transformation of the state of acidification of the C-terminal domain (CTD) of the RNA maximum domain II(PolII) and the transformation of the state of acidification of the RNA maximum domain II(PolII). HeLa and 293T cell cultures were stimulated by various stimuli, including UV irradiation, and a number of additional stimuli were used to detect the development of a variety of disease-related proteins (Bcl-x, Caspase 2, Caspase 9, Mcl-1, Apaf-1). At the same time, CTD's acidification status changes, site-specific acidification recognition, the use of CTD antibody detection In addition, the development of MAPK in the context of CTD is discussed in detail. The results of the study showed that the expression of the gene was related to the expression of the gene, and the expression of the gene was related to the expression of the gene. The qualitative change of the amount of CTD acid under ultraviolet irradiation above a certain amount was observed, and the optional decomposition of PolII maximum CTD acid was observed. A party to the treatment of PolII specific decomposition Now, when Apaf-1 gene is induced, the expression of Apaf-1 gene is close to and the expression of Apaf-1 gene is close to and the expression of Apaf-1 gene is close to the expression of Apaf-1 gene.