転写とmRNAプロセシング過程を協調させている核内蛋白質間相互作用ネットワーク

协调转录和 mRNA 加工过程的核蛋白-蛋白相互作用网络

• 批准号: 13206024
• 负责人: 広瀬 豊
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206024/
• 关键词: RNAポリメラーゼII; 転写; mRNAブロセシング; リン酸化; WWドメイン; 相互作用ネットワーク; 遺伝子発現

真核生物RNAポリメラーゼII(PolII)の最大サブユニツトC-末端領域(CTD)は、保存された7アミノ酸配列の繰り返しからなり、種々のキナーゼによってリン酸化されることにより、mRNA転写及びプロセシングの制御と両者のカップリングに関与していることが明らかになりつつある。本研究は、mRNA転写とプロセシングがどのように相互に関連し制御されているのかを解明するために、リン酸化CTDを中心とする蛋白質間相互作用のネットワーク解析を行うことを目的としている。そのために、リン酸化CTDに結合する新規蛋白質の同定及び同定した蛋白質と更に相互作用する因子の検索を行っている。これまでに、ヒト新規核蛋白質(PCIF1)、細胞周期(Pin1)、mRNAスプライシング(FBP11)、及び蛋白質ユビキチン化(WWP1)に各々関与する因子が、これらの蛋白質中に共通して存在しているWWドメインを介してリン酸化CTDと特異的に結合することを見出している。今年度は以下のことを見い出した。(1)PCIF1の細胞内ターゲットを、酵母two-hybrid法、アフィニティー・タグ免疫沈降法及びGST-WW蛋白質を用いたpull-down法によって検索し、候補因子が得られたので検証中である。またPCIF1がリン酸化蛋自質を標的にし、更にPCIF1自身が細胞周期特異的なリン酸化を受けていることが示唆された。(2)CTD7アミノ酸配列中、2番目(Ser2)及び5番目(Ser5)のセリン残基が細胞内に於ける主なリン酸化部位であるが、PCIF1及びpin1のWWドメインが、どちらか一方のリン酸化を区別して認識出来るかを検討した。リン酸化部位の違うCTDペプチドを用いた結合実験に於いて、PCIF1のWWドメインが、Ser5リン酸化とSer2リン酸化に対し異なるアフィニティーを示したが、Pin1のWWドメインは両者を区別しなかった。

The C-terminal domain (CTD) of eukaryotic RNA fragments II(PolII) is the largest domain in which DNA sequences are conserved. This study aims to clarify the relationship between mRNA expression and protein interaction. A new protein identity and protein interaction model is proposed for the identification of protein and protein. The factors commonly associated with PCIF1, Pin1, FBP11, and WWP1 are found in these proteins. This year, the following is the first time that I have seen you. (1) PCIF1 intracellular protein, yeast two-hybrid method, immunoprecipitation method and GST-WW protein were detected by pull-down method, candidate factors were obtained. PCIF1 is a target for protein self-acidification, and PCIF1 itself is a target for cell-cycle-specific protein acidification. (2)CTD7 amino acid sequence in the middle, second (Ser2) and fifth (Ser5) residues of the main amino acid site in the cell, PCIF1 and pin1 of the WW amino acid, the difference between the two amino acid residues was identified. The acid site of the CTD is used in combination with the acid site of PCIF1, Ser5 and Ser2. The acid site of PCIF1 is used in combination with the acid site of Pin1.