転写装置とmRNAプロセシング装置のクロストーク機構の解析

转录设备与mRNA加工设备之间的串扰机制分析

基本信息

  • 批准号:
    11154209
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

転写やmRNAプロセシングといった核内事象を連携(カップル)させている分子機構を明らかにするアプローチとして、精製した二種類のリン酸化及び非リン酸化フォームのRNAポリメラーゼII(Pol II)のin vitroスプライシング反応に対する影響を解析した。その結果Pol II最大サブユニットのカルボキシル末端領域(CTD)が高度にリン酸化したPol IIはスプライシング反応を強く促進し、一方非リン酸化フォームPol IIは反応を逆に抑制することを見い出し(Hirose et al. Genes & Dev.1999)、Pol IIが、転写後のmRNAプロセシングにも直接的に機能しうることを生化学的にはじめて明らかにすることが出来た。更にPol IIが、CTDのリン酸化調節を介して、転写反応のみならずmRNAプロセシング等の他の核内事象に如何なる分子間相互作用を通じて関わっているかを明らかにするために、リン酸化CTDに結合する新規蛋白質の同定をFar-western法を用いた発現クローニングによって試みた。これまでの解析から、リン酸化CTDに結合する候補蛋白質としてヒトの新規蛋白質PCIF1(Phosphorylated CTD Interacting Factor 1)及び既知のヒト核蛋白質Pin1を同定した。これらの蛋白質のリン酸化CTDとの結合責任領域をFar-western法及びGST-pull down法で同定した。新規蛋白質PCIF1については、flag-PCIF1叉はGFP-PCIF1をトランスフェクトした細胞を用いた免疫共沈実験、及び細胞内局在解析実験より、内在性のリン酸化RNAポリメラーゼIIとPCIF1の細胞内における特異的会合を確認した(未発表データ)。
To analyze the effects of molecular mechanism on the expression of mRNA, protein and protein in the nucleus, protein and protein, and on the expression of RNA in vitro. Results: Pol II maximum temperature range (CTD) is high, Pol II maximum temperature range (CTD) is high,(Hirose et al. Genes & Dev. 1999), Pol II, mRNA expression after transcription, direct function, biochemical function, etc. In addition, Pol II, CTD and other intracellular events such as mRNA expression, transcription, and protein regulation are discussed. The candidate protein for the analysis and acidification of CTD binding was identified as the new protein PCIF1(Phosphorylated CTD Interacting Factor 1) and the known nuclear protein Pin1. The joint responsibility areas for protein acidification, CTD and CTD are determined by the Far-western method and the GST-pull down method. The new protein PCIF1 contains two distinct proteins: flag-PCIF1 and GFP-PCIF1. These proteins are used in cellular immunoprecipitation, and in intracellular analysis. Intrinsic RNA is used in cellular immunoprecipitation II and PCIF1.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Y. Hirose et al.: "Phosphorylated RNA polymeraseII stimulates pre-mRNA splicing"Genes & Development. 13. 1234-1239 (1999)
Y. Hirose 等人:“磷酸化 RNA 聚合酶 II 刺激前 mRNA 剪接”基因
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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