RNAポリメラーゼIIによるmRNAスプライシング調節機構の解析

RNA聚合酶II对mRNA剪接调控机制分析

• 批准号: 11155211
• 负责人: 広瀬 豊
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155211/
• 关键词: RNAポリメラーゼII; 転写; mRNAスプライニング; mRNAプロセシング

転写やmRNAプロセシングといった核内事象を連携(カップル)させている分子機構を明らかにするアプローチとして、精製した二種類のリン酸化及び非リン酸化フォームのRNAポリメラーゼII(Pol II)のin vitroスプライシング反応に対する影響を解析した。その結果Pol II最大サブユニットのカルボキシル末端領域(CTD)が高度にリン酸化したPol IIはスプライシング反応を強く促進し、一方非リン酸化フォームPol IIは反応を逆に抑制することを見い出し(Hirose et al. Genes & Dev.1999)、Pol IIがmRNAプロセシング装置と物理的に相互作用出来るだけでなく、CTDのリン酸化調節を介してプロセシング反応を機能的に制御できる可能性を生化学的に示すことが出来た。更にPoll IIが、CTDのリン酸化調節を介して、転写反応のみならずmRNAプロセシング等の他の核内事象に如何なる分子間相互作用を通じて関わっているかを明らかにするために、リン酸化CTDに結合する新規蛋白質の同定をFar-western法を用いた発現クローニングによって試みた。これまでの解析から、リン酸化CTDに結合する候補蛋白質としてヒトの新規蛋白質PCIF1(Phosphorylated CTD Interacting Factor 1)及び既知のヒト核蛋白質Pin1を同定した。これらの蛋白質のリン酸化CTDとの結合責任領域をFar-western法及びGST-pull down法で同定した。新規蛋白質PCIF1については、flag-PCIF1叉はGFP-PCIF1をトランスフェクトした細胞を用いた免疫共沈実験、及び細胞内局在解析実験より、内在性のリン酸化RNAポリメラーゼIIとPCIF1の細胞内における特異的会合を確認した(未発表データ)。

In the case of mRNA, there is a general understanding that the molecular mechanism is responsible for the chemical acidification and non-chemical acidification of RNA. This is the result of a comprehensive analysis of the impact of in vitro on the performance of the system. The results show that Pol II maximum acidification (CTD), high acidification, Pol II acidification, anti-acidizing, anti-acidifying, anti-acidizing, anti-acidizing, anti-acidifying, anti-acidizing, anti- Genes & Dev.1999), Pol II mRNA equipment, physical interaction, CTD acidification, acidification, chemical reaction, biochemistry, biochemistry, chemical reaction, chemical reaction, biochemical mechanism, biochemical mechanism. To compare Poll II, CTD acidification, mRNA, and other nuclear matters such as how to detect intermolecular interaction, to determine how to detect molecular interaction, to determine how to use acidified CTD and new regulatory protein to determine the same level of Far-western, and to detect how to detect molecular interaction. The target protein PCIF1 (Phosphorylated CTD Interacting Factor 1) and nucleocapsid protein Pin1 (Pin1) were identified by the combination of recombinant protein (Phosphorylated CTD Interacting Factor 1) and acidified DNA. The protein was acidified and CTD was acidified. The Far-western method and the GST-pull down method were used to determine the same concentration in any field. New regulation protein (PCIF1), GFP-PCIF1 protein (flag-PCIF1), immune co-deposition (ICR), and intracellular protein analysis (RNA, acidification, RNA, II, PCIF1, intracellular protein rendezvous) (not shown in the table).

项目成果

Y. Hirose et al.: "Phosphorylated RNA polymerase II stimulates pre-mRNA splicing"Genes & Development. 13. 1234-1239 (1999)

Y. Hirose 等人：“磷酸化 RNA 聚合酶 II 刺激前 mRNA 剪接”基因