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ヒト脳由来神経系幹細胞株の分化誘導系によるHIVウイルス標的細胞の同定

利用人脑源性神经干细胞系分化诱导系统鉴定HIV病毒靶细胞

基本信息

批准号：
12035213
负责人：
田代啓
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

実物の脳や脳細胞のプライマリーカルチャーでは、マクロファージやマイクログリアが存在するため、それよりはるかに感染頻度の低い神経系幹細胞などの細胞の解析は困難である。我々は、京都大学倫理委員会の承認のもと、FGF-2とEGF依存性のヒト中枢神経幹細胞を樹立の最終局面に到達している。我々の分化誘導条件では、ヒト中枢神経幹細胞からは血球系由来のマクロファージとマイクログリアおよび内皮細胞は出現しないため、アストログリアや、諸タイプのニューロンに対するHIVウィルスの感染の動態を解析するのに適している。本研究ではHIV-1はヒト脳由来神経系幹細胞に感染するのか、この実験系の特性を活用してアストログリアへの感染の動態および、分子メカニズムと、諸タイプのニューロンやオリゴデンドログリオサイトへの感染の有無を検討する。ヒト神経幹細胞(nNSC)およびヒトT cell line(M8166;C8166R5)2X10^4 cells/wellに対し、NL432(X4)およびBAL(R5)102-103 TCID50を感染し、そのまま培養を続け、培養上清中のRT活性を測定することによりproductive infectionの有無を検討した(A)。また別に実験において、より高い量のTCID50(10^3-10^5)を感染させ、2時間後に上清をwashし、以下同様にRT活性を測定した(B)。今回の結果では、ヒト神経幹細胞に、NL432(X4)、BAL(R5)の感染成立は認められなかった。前回の報告にて、ヒト神経幹細胞におけるCD4、CXCR4、CCR5の発現をRT-PCRにより確認しているが、今回の結果より、これらのレセプターがviral entryの成立を可能にするような細胞表面分布をしているかどうか、すなわち細胞表面レセプター陽性細胞の率と、写真に示すようにヒト神経幹細胞培養に特徴的に認められるneurosphereの形成が感染成立に抑制的に働くかを検討する必要がある。また、その他のアッセイ法により、どのような条件においても感染が本当に成立しないかより慎重な検討が必要である。今後、上記仮説が確認されれば、神経幹細胞から、分化した脳細胞へ、どの段階から感染が成立するのか、興味深い。また、これらの解析から、neuro AIDSのpathogenesisのみならず、幹細胞を用いた治療の可能性も明らかにされることが期待される。

The frequency of infection of stem cells is low and the analysis of stem cells is difficult. We believe that the recognition of FGF-2 and EGF dependence by the Ethics Committee of Kyoto University has reached the final stage of the establishment of central nervous stem cells. Our differentiation induction conditions include: central nervous stem cell differentiation; blood lineage origin; endothelial cell emergence; and analysis of HIV infection dynamics. This study examines the dynamics of HIV-1 infection from stem cells, the use of the characteristics of the system, the dynamics of HIV-1 infection, molecular mechanisms, and the presence or absence of HIV-1 infection. Human stem cells (nNSC) and T cell line(M8166; C8166R5)2X10^4 cells/well, NL432(X4) and BAL(R5)102-103 TCID50 were infected, cultured, and RT activity in culture supernatants was measured. The presence or absence of productive infection was discussed (A). TCID50(10^3-10^5) was measured at the end of infection, supernatant was washed after 2 hours, and RT activity was measured at the end of infection (B). The results of this study are as follows: NL432 (X4), BAL(R5) and NL432 (X4). Previous reports confirmed the presence of CD4, CXCR4, CCR5 in human brain stem cells by RT-PCR, and the results of this study confirmed the presence of CD4, CXCR4, CCR5 in human brain stem cells by RT-PCR. The characteristics of neurosphere formation and infection inhibition are discussed. It is necessary to carefully examine the conditions under which infection should occur. In the future, the above notes confirm that there is a deep interest in the development of neural stem cells, differentiation of cells, and the establishment of infection at different stages. The possibility of stem cell therapy is expected.