新たなHIV-1ウイルス感染標的細胞としてのヒト脳由来神経系幹細胞の解析

人脑源性神经干细胞作为HIV-1病毒感染新靶细胞的分析

• 批准号: 13015209
• 负责人: 田代 啓
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015209/
• 关键词: HIVウイルス; エイズ脳症; 脳神経; ウイルス受容体; 神経幹細胞; 標的細胞; CXCR4; CCR5

HIV-1は、脳内でどのような細胞に感染するのか、神経幹細胞に感染するのかを明らかにするため、我々は、FGF-2とEGF依存性のヒト中枢神経幹細胞の系を用いて解析を進めてきた。この系では、血球系由来のマクロファージとマイクログリアおよび内皮細胞は出現しないため、アストログリアや諸タイプのニューロンに対するHIV-1ウイルス感染の動態を解析するのに適している。(1)ヒト中枢神経幹細胞には、CD4、CXCR4、CCR5の発現は認められること(RT-PCR)、(2)ヒト中枢神経幹細胞には、NL432(X4)、BAL(R5)の感染成立は認められないこと(培養上清中RT活性)を確認した。さらに(3)神経幹細胞から分化した神経細胞では感染が成立するかどうか、(4)また神経幹細胞や分化した神経細胞へ、ウイルス吸着とエントリーのステップをバイパスして実験的な遺伝子導入(トランスフェクション)そのものが成立するかを検討した。神経幹細胞ならびに分化誘導後細胞にNL432(X4)およびBaL(R5)を10^1-10^5TCID50を感染させた。ウイルス感染後、3日目ごとに培養上清を回収し、RT活性を測定した。その結果、ヒト神経幹細胞へのNL432(X4)、BaL(R5)感染は認められないことに加え、さらに分化させた状態においても両ウイルスの感染は成立しないことが明らかとなった。神経幹細胞ならびに分化誘導後細胞への遺伝子導入の効率を調べるために、pCMX、pCMX-lacZ、NL432(X4)plasmid、JR-FL(R5)plasmidを用い、FuGENEにてトランスフェクションした。neurosphereを形成するヒト神経幹細胞へも、さらに分化誘導後の神経細胞へも導入できる条件を最適化して、遺伝子導入しても感染成立しないことを明らかにした。

HIV-1, EGF, EGF, This system is based on the analysis of the dynamics of HIV-1 infection in endothelial cells and the origin of the lineage. (1)(2) Identification of infection establishment in CNS stem cells, NL432(X4), BAL(R5) and (3) Identification of RT activity in culture supernatant. (3) The establishment of infection in the differentiated neurons of neural stem cells;(4) The establishment of infection in the differentiated neurons of neural stem cells; and (5) The establishment of infection in the differentiated neurons of neural stem cells. Neuro stem cells are differentiated and infected by NL432(X4) and BaL(R5). After infection, the supernatant was recovered and RT activity was measured. The results showed that NL432 (X4) and BaL(R5) infection of neural stem cells was not confirmed. The efficiency of gene introduction into cells after differentiation of neural stem cells was modulated by pCMX, pCMX-lacZ, NL432 (X4)plasmid, JR-FL(R5)plasmid and FuGENE. Neurosphere formation, differentiation, and induction of neural stem cells into cells under optimal conditions, and infection.

项目成果

Shinohara, M.T., Ogura, A., Ikegawa, M., Inoue, K., Ogonuki, N., Tashiro, K., Toyokuni, S., Honjo, T., Shinohara, T.: "Adenovirus-mediated gene delivery and in vitro microinsemination produce offspring from infertile male mice"Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.. 9

Shinohara，M.T.，Ogura，A.，Ikekawa，M.，Inoue，K.，Ogonuki，N.，Tashiro，K.，Toyokuni，S.，Honjo，T.，Shinohara，T.：“腺病毒介导的基因传递

Kinoshita, M., Nakamura, T., Ihara, M., Haraguchi, T., Hiraoka, Y., Tashiro, K., Noda, M.: "Identification of human endomucin-1, and -2 as membrane-bound sialoglycoproteins eith anti-adhesive activity"FEBS Lett.. 499. 121-126 (2001)

Kinoshita, M.、Nakamura, T.、Ihara, M.、Haraguchi, T.、Hiraoka, Y.、Tashiro, K.、Noda, M.：“鉴定人内粘蛋白-1 和 -2 为膜结合型

Hattori, K., Rafii, S., Heissig, B., Tashiro, K., Honjo, T., Takeno, M., Shieh, J-H, Hackett, N.R., Crystal, R.G., Moore, M.S.: "Plasma elevation of stromal derived factor-1 induces mobilization of mature and immature hematopoietic progenitor and stem cel

Hattori, K.、Rafii, S.、Heissig, B.、Tashiro, K.、Honjo, T.、Takeno, M.、Shieh, J-H、Hackett, N.R.、Crystal, R.G.、Moore, M.S.：“

Kanazawa, N., Okazaki, T., Nishimura.H., Tashiro K., Inaba K., Miyachi, Y.: "DCIR acts as an inhibitory receptor depending on its immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif"J. Invest. Dermatol.. 118. 261-266 (2002)

Kanazawa, N.、Okazaki, T.、Nishimura.H.、Tashiro K.、Inaba K.、Miyachi, Y.：“DCIR 根据其基于免疫受体酪氨酸的抑制基序发挥抑制性受体作用”。

Nakamura, T., Ruiz-Lozano, P., Ikeda, Y., Iwanaga, I., Hinek, A., Minamisawa, S., Chen, C.-F., Kobuke, K., Nancy, D., Takada, Y., Tashiro, K., Ross, J., Honjo, T., Chien, R.K.: "Fibulin-5/DANCE is essential for elastogenesis in vivo"Nature. 415. 171-175 (

Nakamura, T.、Ruiz-Lozano, P.、Ikeda, Y.、Iwanaga, I.、Hinek, A.、Minamisawa, S.、Chen, C.-F.、Kobuke, K.、Nancy, D.、