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SDF1発現アデノウイルスによるエイズ遺伝子治療法開発と、SDF1の諸作用の検討.

使用表达SDF1的腺病毒开发艾滋病基因疗法并研究SDF1的各种作用。

基本信息

批准号：
09258213
负责人：
田代啓
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09258213/
关键词：
SDF-1 エイズ HIV-1 アテツウイスル遺伝子治療抗体 ELISA サイトカイン

项目摘要

T細胞親和性HIV-1ウイルスのT細胞への感染防止のためSDF-1生体内濃度を高く維持する方法を開発することが、エイズ発症阻止への緊急かつ重要な課題である。そのためにSDF-1濃度測定系の樹立が不可欠である。遺伝子治療的対エイズ戦略樹立にむけ、これらの課題解決のため実験し、以下の様に重要な結果を得たので報告する。1:7種のSDF-1ベプチドに対する抗SDF-1ラビット抗血清を作製し、抗体を抗原アフィニティーカラムで精製した。各抗体の特異性をウェスタン解析と免疫沈降法で確認した。それを用いてSDF-1タンパク質濃度を定量するため、サンドイッチELISA法を樹立し、マウスSDF-1タンパク質を1ng/mlの感度で測定することに成功した。2:マウスSDF-1α及びSDF-1β発現アデノウイルスベクターを構築し、複製能欠損組み換えアデノウイルスを単離、2段階の塩化セシウムステップ密度遠心法にて精製し、10^<11>pfu/mlの力価のウイルス液を得た。得られた複製能欠損SDF-1β発現アデノウイルスをHela細胞株に感染し、培養上清中に1μg/ml以上のSDF-1βタンパク質が分泌されたことをウェスタン解析とELISA法で確認した。現在、同じウイルス液を尾静脈からマウスに投与後、経時的に採血して、SDF-1の生体内でのタンパク質化学的存在様式及びその安定性をウエスタン解析と免疫沈降法とサンドイッチELISA法にて検討する一方、SDF-1の免疫系等諸臓器への影響をCD4やCD8モノクローナル抗体を用いるFACS解析と免疫組織学的方法にて検討中である。

T-cell affinity HIV-1 infection prevention and maintenance of SDF-1 concentrations in vivo are important issues to develop and prevent HIV-1 infection. The SDF-1 concentration determination system was established. The results of the study were reported in the following sections: 1:7 kinds of SDF-1 antisera were prepared and purified. The specificity of each antibody was determined by immunoprecipitation assay. The concentration of SDF-1 was quantified by ELISA, and the sensitivity of SDF-1 was determined successfully. 2: SDF-1α and SDF-1β were found to be able to construct, replicate, and isolate the energy deficit components, refine, and purify the two-stage chemical system with a density of 10^<11>pfu/ml. The expression of SDF-1 β in Hela cells was confirmed by ELISA. Now, after administration of SDF-1, blood samples were collected at different times. The chemical existence and stability of SDF-1 in vivo were analyzed by immunosedimentation assay. ELISA was used to investigate the effects of SDF-1 on CD4 and CD8 immune system.