ヤドクガエルAtelopus.zetekiの毒zetekitoxinの構造解析

箭毒蛙 Atelopus.zeteki 毒泽特毒素的结构分析

• 批准号: 12045210
• 负责人: 山下 まり
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12045210/
• 关键词: ゼテキトキシン; カエル; 毒; サキシトキシン

中南米に生息するAtelopus(ヤセヤドクガエル)属のカエルの多くは、主に皮膚に水溶性毒を有する。1975年にコスタリカ産のAtelopus属のカエルからtetrodotoxinが同定されたが、zetekitoxinはすでに1969年に、Furman,Mosherによってパナマ産のA.zetekiに存在する新規の水溶性低分子毒として報告された。しかし、zetekitoxinは、その後、A.zetekiが保護条約下に置かれ、試料が入手出来なくなったことから、その構造は発見から約30年間未定であった。韓国科学技術院のY.H.Kim教授から規制前に精製された半精製品及び精製品のzetekitoxinを供与された。本研究は立体構造を含めたzetekitoxinの構造決定を行うことを目的とした。1.精製Biogel P-2,BioRex70,Hitachi gel3011Cを用いたHPLCで半精製品のzetekitoxinを精製し、純品を約300-400μg得た。2.性状FT-IR(ZnSe)1702,1561,1421,1338,1268cm^<-1>;HR-ESIMS[M+H]^+m/z553.1369(calcd for[C_<16>H_<25>N_8O_<12>S_1]^+m/z553.1313.[M-SO_3+H]^+m/z473.1725(calcd for[C_<16>H_<25>N_8O_9]^+m/z473.1744.この結果から、硫酸エステルの存在が示唆された。TLC(Silica gel 60)Pyr-EtOAc-AcOH-H_2O(15:7:3:6)Rf0.57(tetrodotoxin:0.50,saxitoxin:0.36).saxitoxinと同様に1%H_2O_2/H_2O(v/v)噴霧、加熱後にUV365nmで蛍光スポットとして検出された。3.NMRスペクトルと平面構造の推定NMRスペクトルは全て4%CD_3COOD/D_2O中、20℃か30℃で測定した。^1H-^1HCOSY,TNTOCSY,HSQC,HMBC,NOESY,NOE差,^<13>C NMRスペクトルの解析から、saxitoxin骨格を部分構造にウレタン、N-OHをもつ、非常に特異な新規構造を推定した。

Atelus () belongs to the genus Atelus, which is mainly water-soluble in skin. In 1975, the genus Atelopus was identified as tetrodotoxin, and in 1969, Furman,Mosher was identified as A.zeteki. A. zeteki, zetekitoxin, A.zeteki, A.zeteki, A. zeteki Professor Y.H.Kim of the Korean Academy of Science and Technology introduced zetekitoxin for semi-refined products and refined products before regulation. This paper studies the structural determination of three-dimensional structure. 1. Purified Biogel P-2,BioRex70,Hitachi gel3011C. The semi-refined zetekitoxin was purified by HPLC and obtained in pure form at about 300-400μg. 2. FT-IR(ZnSe) 1702, 1561, 1421, 1338, 1268cm ^<-1>;HR-ESIMS[M+H]^+m/z553.1369(calcd for[C_<16>H_<25>N_8O_<12>S_1]^+m/z553.1313. [M-SO_3+H]^+m/z473.1725(calcd for[C_<16>H_<25>N_8O_9]^+m/z473.1744. TLC(Silica gel 60)Pyr-EtOAc-AcOH-H_2O (15:7:3:6)Rf0.57(tetradotoxin: 0.50, saxitoxin:0.36).saxitoxin is the same as 1%H_2O_2/H_2O(v/v). 3. NMR spectrum estimation of planar structure NMR spectrum determination of 4%CD_3COOD/D_2O at 20℃ to 30℃1H-^1HCOSY,TNTOCSY,HSQC,HMBC,NOESY,NOE difference,^<13>C NMR analysis, saxitoxin skeleton partial structure, N-OH, very specific new structure is presumed.

项目成果

Y.Shoi.,M.Yotsu-Yamashita et al.: "Electrospray Ionization Mass Spectrometry of Tetrodotoxin and its Analogs : Liquid Chromatography/Mass Spectrometry, Tandem Mass Spectrometry, and Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry"Anal, Biochem.. 290(1). 10

Y.Shoi.，M.Yotsu-Yamashita 等人：“河豚毒素及其类似物的电喷雾电离质谱法：液相色谱/质谱、串联质谱和液相色谱/串联质谱”Anal，Biochem.. 290（

E.J.Nunez-Vazquez,M,Yotsu-Yamashita et al.: "Toxicities and distribution of tetrodotoxin in the tissues on puffer fish found in the coast of the Baja California Peninsula, Mexico."Toxicon. 38. 729-734 (2000)

E.J.Nunez-Vazquez,M,Yotsu-Yamashita 等人：“墨西哥下加利福尼亚半岛海岸发现的河豚毒素的毒性和组织中的分布。”Toxicon。

M.Yotsu-Yamashita. et al.: "The levels of tetrodotoxin and its analogue 6-epitetrodotoxin in the red-spotted newts, Notophthalmus viridescens."Toxicon. (in press). (2001)

M.四山下。

H.Yotsu-Yamashita, et al.: "Binding Properties of ^3H-PbTx-3 and 3H-saxitoxin to Brain Membranes and to Skeletal Muscle Membranes of Puffer Fish Fugu pardalis, and the Primary Structure of a Voltage-Gated Na^+ Channel α-Subunit (fMNal) from Skeletal Muscl

H. Yotsu-Yamashita 等人：“^3H-PbTx-3 和 3H-石房蛤毒素与河豚河豚脑膜和骨骼肌膜的结合特性，以及电压门控 Na^+ 的一级结构来自骨骼肌的通道 α 亚基 (fMNal)