フグ血漿中のテトロドトキシン、サキシトキシン結合蛋白質の構造と機能

河豚血浆中河豚毒素和石房蛤毒素结合蛋白的结构和功能

• 批准号: 13024210
• 负责人: 山下 まり
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13024210/
• 关键词: テトロドトキシン; サキシトキシン; 結合蛋白質; 結合タンパク質; フグ

ヒガンフグ(Fugu pardalis)血漿中に、テトロドトキシン(TTX)及びサキシトキシン(STX)と結合する糖蛋白質(pufferfish STX and TTX binding protein : PSTBP)を見い出し、フグの毒の体内輸送、蓄積や代謝に関与するのではないかと考えた。PSTBPとの結合におけるTTX, STXの相互の競合的結合阻害について、及びNMRスペクトルを用いたdcSTXとPSTBPの結合状態の解析を行った。1)TTX, STXの相互の競合的結合阻害についてSTX標品、TTX標品及び精製PSTBPとSTXs, TTXsの蛍光HPLCを用いて相互の結合阻害実験を行った。その結果、TTXのIC_<50>は、81±16μM(n=2)であった。また、同様に濃度一定のTTX(1.6μM)とPSTBP(1.2μM)に濃度可変のSTXを加えて同様の操作を行って求めたSTXのIC_<50>は0.35±0.057μM(n=2)であった。もし単純な競合結合であるならば、TTXのIC_<50>(81μM)から予想されるSTXのIC_<50>は、0.0093μMであるが、実際は38倍大きかった。この結果より、TIX、STXのPSTBPとの結合が単純な競合モデルでは説明できないと考えられた。2)NMRスペクトルを用いたdcSTXとPSTBPの結合状態の解析の試みSTXの同族体のC1,C2を生産する、淡水産らん藻に^<13>CラベルCO_2存在下で培養し、^<13>Cを取り込ませたC1,C2を生産させた。化学変換によりSTXと同等にPSTBPと強く結合するdcSTXを調製した。ラベル化dcSTXに、徐々にPSTBPを加えてdcSTXの^<13>C及び^1Hのケミカルシフトの変化をHSQCで追跡したところ、dcSTXのシグナルの検出感度が低下しdcSTXのクロスピークは完全に検出不可能となった。dcSTXがPSTBPと弾く結合し、PSTBP中に完全にはまりこんだことにより、T2が減少して感度が低下したと考えられた。

ヒ ガ ン フ グ (Fugu pardalis) in plasma に, テ ト ロ ド ト キ シ ン (TTX) and び サ キ シ ト キ シ ン (STX) と す る sugar protein (pufferfish STX and TTX binding protein: PSTBP) を see い し, フ グ の poison の the metabolism of transportation and accumulation や に masato and す る の で は な い か と exam え た. PSTBP と の combining に お け る TTX, STX の の competition each other the combination of the resistance against に つ い て and び NMR ス ペ ク ト ル を with い た dcSTX と PSTBP の combining state line analytical を の っ た. 1) TTX, STX の の competition each other the combination of the resistance against に つ い て STX standard product, TTX standard substance and び refined PSTBP と STXs, TTXs の 蛍 light HPLC を with い て の combined with resistance to harm each other be 験 を line っ た. Youdaoplaceholder0 そ results, TTX そ IC_<50> そ, 81±16μM(n=2)であった. ま た, with others in に concentration must be の TTX (1.6 microns) と PSTBP (1.2 microns) に concentration can be - の STX を plus え て with others の operating line を っ て o め た STX の IC_ < > 50 は 0.35 + / - 0.057 microns (n = 2) で あ っ た. も し 単 pure な competition combined with で あ る な ら ば, TTX の IC_ < > 50 (81 microns) か ら to think さ れ る STX の IC_ < > 50 は, 0.0093 mu M で あ る が, be interstate は 38 times as big as き か っ た. こ の results よ り, TIX, STX の PSTBP と の combining が 単 concurrence of pure な モ デ ル で は illustrate で き な い と exam え ら れ た. 2) NMR ス ペ ク ト ル を with い た dcSTX と PSTBP の based on analytical の state の み STX の homolog の C1 and C2 を production す る, fresh water is produced ら ん algal に ^ < 13 > C ラ ベ ル で し, in the presence of CO_2 ^ < 13 > C を り 込 ま せ た C1 and C2 を production さ せ た. Chemical transformation によ と STXと equivalent にPSTBPと strong く combination するdcSTXを modulation た た. ラ ベ ル change dcSTX に and xu 々 に PSTBP を plus え て dcSTX の ^ < > 13 C and び ^ 1 h の ケ ミ カ ル シ フ ト の variations change を HSQC で tracing し た と こ ろ, dcSTX の シ グ ナ ル の 検 out sensitivity low が し dcSTX の ク ロ ス ピ ー ク は completely に 検 out impossible と な っ た. DcSTX が PSTBP と 弾 く し, PSTBP に complete に は ま り こ ん だ こ と に よ り, T2 が reduce し て sensitivity low が し た と exam え ら れ た.

项目成果

M.Yotsu-Yamashita et al.: "Purification, chracterization, and cDNA cloning or a novel soluble saxitoxin and tetrodotoxin binding protein from plasma of the puffer fish, Fugu pardalis"Eur. J. Biochem.. 268(2). 5937-5946 (2001)

M.Yotsu-Yamashita 等人：“从河豚鱼血浆中纯化、表征和 cDNA 克隆或新型可溶性石房蛤毒素和河豚毒素结合蛋白”Eur。

Mari Yotsu-Yamashita: "Sodium Channels of Puffer Fish"Nippon Suisan Gakkaishi. 68. 925-926 (2002)

Mari Yotsu-Yamashita：“河豚的钠通道”日本水产学会。

Tagiri-Endo, M, et al.: "Ozonation of phosphatidylcholine in ethanol : separation and identification of a novel ethoxyhydroperoxide"Lipids. 37. 1007-1012 (2002)

Tagiri-Endo, M 等人：“乙醇中磷脂酰胆碱的臭氧化：新型乙氧基氢过氧化物的分离和鉴定”脂质。

Y.Shoji, M.Yotsu-Yamashita et al.: "ElecLrospray Ionization Mass Spectrometry of Tetrodotoxin and its Analogs : Liquid Chromatography / Mass Spectrometry, Tandem Mass Spcctrometry, and Liquid ChromatoRrapby / Tandem Mass Spectrometry"Anol. Biochem.. 290(1

Y.Shoji，M.Yotsu-Yamashita 等人：“河豚毒素及其类似物的电喷雾电离质谱法：液相色谱/质谱法、串联质谱法和液相色谱法/串联质谱法”Anol。

Mari Yotsu-Yamashita, et al.: "Mutual inhibition of tetrodotoxin and saxitoxin binding to their binding protein from plasma of the puffer fish, Fugu pardalis"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66. 2520-2524 (2002)

Mari Yotsu-Yamashita 等：“河豚毒素和石房蛤毒素与河豚鱼血浆中的结合蛋白的相互抑制”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66. 2520-2524 (2002)