フグ血漿中のテトロドトキシン、サキシトキシン結合蛋白質の構造と機能

河豚血浆中河豚毒素和石房蛤毒素结合蛋白的结构和功能

• 批准号: 13024210
• 负责人: 山下 まり
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13024210/
• 关键词: テトロドトキシン; サキシトキシン; 結合蛋白質; 結合タンパク質; フグ

ヒガンフグ(Fugu pardalis)血漿中に、テトロドトキシン(TTX)及びサキシトキシン(STX)と結合する糖蛋白質(pufferfish STX and TTX binding protein : PSTBP)を見い出し、フグの毒の体内輸送、蓄積や代謝に関与するのではないかと考えた。PSTBPとの結合におけるTTX, STXの相互の競合的結合阻害について、及びNMRスペクトルを用いたdcSTXとPSTBPの結合状態の解析を行った。1)TTX, STXの相互の競合的結合阻害についてSTX標品、TTX標品及び精製PSTBPとSTXs, TTXsの蛍光HPLCを用いて相互の結合阻害実験を行った。その結果、TTXのIC_<50>は、81±16μM(n=2)であった。また、同様に濃度一定のTTX(1.6μM)とPSTBP(1.2μM)に濃度可変のSTXを加えて同様の操作を行って求めたSTXのIC_<50>は0.35±0.057μM(n=2)であった。もし単純な競合結合であるならば、TTXのIC_<50>(81μM)から予想されるSTXのIC_<50>は、0.0093μMであるが、実際は38倍大きかった。この結果より、TIX、STXのPSTBPとの結合が単純な競合モデルでは説明できないと考えられた。2)NMRスペクトルを用いたdcSTXとPSTBPの結合状態の解析の試みSTXの同族体のC1,C2を生産する、淡水産らん藻に^<13>CラベルCO_2存在下で培養し、^<13>Cを取り込ませたC1,C2を生産させた。化学変換によりSTXと同等にPSTBPと強く結合するdcSTXを調製した。ラベル化dcSTXに、徐々にPSTBPを加えてdcSTXの^<13>C及び^1Hのケミカルシフトの変化をHSQCで追跡したところ、dcSTXのシグナルの検出感度が低下しdcSTXのクロスピークは完全に検出不可能となった。dcSTXがPSTBPと弾く結合し、PSTBP中に完全にはまりこんだことにより、T2が減少して感度が低下したと考えられた。

The pufffish STX and TTX binding protein (PSTBP) in Fugu pardalis plasma is involved in the transport, accumulation and metabolism of toxins. The binding of PSTBP to TTX, STX to each other, and the binding resistance of NMR to DCSTX to PSTBP 1)TTX, STX and their mutual competing binding inhibition are used in the determination of binding inhibition between STX standard, TTX standard and purified PSTBP and STXs, TTXs by UV HPLC. Results, TTX, IC, <50>81±16μM(n=2). The concentration of TTX(1.6μM) and PSTBP(1.2μM) was constant, but the concentration of STX was variable. The IC of STX <50>was 0.35±0.057μM(n=2). The IC_<50>(81μM) of TTX is 38 times larger than that of STX<50>, 0.0093μM. The result is that TIX, STX and PSTBP are combined in a pure way. 2)NMR analysis of the binding state of dcSTX and PSTBP in the medium of STX congeners C1, <13><13>C2 production and purification in the presence of CO2. Chemical conversion of STX to PSTBP and strong binding of DCSTX DCSTX is a new type of DCSTX, which can be used to detect the PSTBP, <13>DCSTX and DCSTX. dcSTX

项目成果

M.Yotsu-Yamashita et al.: "Purification, chracterization, and cDNA cloning or a novel soluble saxitoxin and tetrodotoxin binding protein from plasma of the puffer fish, Fugu pardalis"Eur. J. Biochem.. 268(2). 5937-5946 (2001)

M.Yotsu-Yamashita 等人：“从河豚鱼血浆中纯化、表征和 cDNA 克隆或新型可溶性石房蛤毒素和河豚毒素结合蛋白”Eur。

Mari Yotsu-Yamashita: "Sodium Channels of Puffer Fish"Nippon Suisan Gakkaishi. 68. 925-926 (2002)

Mari Yotsu-Yamashita：“河豚的钠通道”日本水产学会。

Tagiri-Endo, M, et al.: "Ozonation of phosphatidylcholine in ethanol : separation and identification of a novel ethoxyhydroperoxide"Lipids. 37. 1007-1012 (2002)

Tagiri-Endo, M 等人：“乙醇中磷脂酰胆碱的臭氧化：新型乙氧基氢过氧化物的分离和鉴定”脂质。

Y.Shoji, M.Yotsu-Yamashita et al.: "ElecLrospray Ionization Mass Spectrometry of Tetrodotoxin and its Analogs : Liquid Chromatography / Mass Spectrometry, Tandem Mass Spcctrometry, and Liquid ChromatoRrapby / Tandem Mass Spectrometry"Anol. Biochem.. 290(1

Y.Shoji，M.Yotsu-Yamashita 等人：“河豚毒素及其类似物的电喷雾电离质谱法：液相色谱/质谱法、串联质谱法和液相色谱法/串联质谱法”Anol。

Mari Yotsu-Yamashita, et al.: "Mutual inhibition of tetrodotoxin and saxitoxin binding to their binding protein from plasma of the puffer fish, Fugu pardalis"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66. 2520-2524 (2002)

Mari Yotsu-Yamashita 等：“河豚毒素和石房蛤毒素与河豚鱼血浆中的结合蛋白的相互抑制”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66. 2520-2524 (2002)