フグ血漿中のテトロドトキシン、サキシトキシン結合蛋白質の構造と機能

河豚血浆中河豚毒素和石房蛤毒素结合蛋白的结构和功能

基本信息

批准号：
13024210
负责人：
山下まり
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒガンフグ(Fugu pardalis)血漿中に、テトロドトキシン(TTX)及びサキシトキシン(STX)と結合する糖蛋白質(pufferfish STX and TTX binding protein : PSTBP)を見い出し、フグの毒の体内輸送、蓄積や代謝に関与するのではないかと考えた。PSTBPとの結合におけるTTX, STXの相互の競合的結合阻害について、及びNMRスペクトルを用いたdcSTXとPSTBPの結合状態の解析を行った。1)TTX, STXの相互の競合的結合阻害についてSTX標品、TTX標品及び精製PSTBPとSTXs, TTXsの蛍光HPLCを用いて相互の結合阻害実験を行った。その結果、TTXのIC_<50>は、81±16μM(n=2)であった。また、同様に濃度一定のTTX(1.6μM)とPSTBP(1.2μM)に濃度可変のSTXを加えて同様の操作を行って求めたSTXのIC_<50>は0.35±0.057μM(n=2)であった。もし単純な競合結合であるならば、TTXのIC_<50>(81μM)から予想されるSTXのIC_<50>は、0.0093μMであるが、実際は38倍大きかった。この結果より、TIX、STXのPSTBPとの結合が単純な競合モデルでは説明できないと考えられた。2)NMRスペクトルを用いたdcSTXとPSTBPの結合状態の解析の試みSTXの同族体のC1,C2を生産する、淡水産らん藻に^<13>CラベルCO_2存在下で培養し、^<13>Cを取り込ませたC1,C2を生産させた。化学変換によりSTXと同等にPSTBPと強く結合するdcSTXを調製した。ラベル化dcSTXに、徐々にPSTBPを加えてdcSTXの^<13>C及び^1Hのケミカルシフトの変化をHSQCで追跡したところ、dcSTXのシグナルの検出感度が低下しdcSTXのクロスピークは完全に検出不可能となった。dcSTXがPSTBPと弾く結合し、PSTBP中に完全にはまりこんだことにより、T2が減少して感度が低下したと考えられた。

在Fugu Pardalis的血浆中发现了结合四毒素（TTX）和萨克西毒素（STX）的Pufferfish STX和TTX结合蛋白（PSTBP），并且人们认为它可以参与体内运输，积累，积累和代谢。使用NMR光谱分析了TTX和STX相互结合的竞争性抑制，DCSTX和PSTBP的结合状态。 1）使用STX制剂，TTX制剂，纯化的PSTBP和stxs的荧光HPLC进行TTXS，TTXS，TTXS，对TTX和STX之间的相互结合有效抑制。结果，TTX的IC_ <50>为81±16μm（n = 2）。另外，通过执行相同过程获得的STX的IC_ <50>通过以恒定浓度（1.6μm）和PSTBP（1.2μm）添加可变浓度STX获得的0.35±0.057μm（n = 2）。如果它是一种简单的竞争结合，那么从IC_ <50>（81μm）TTX预测的STX的IC_ <50>为0.0093μm，但实际上它大的38倍。基于这些结果，人们认为TIX和STX与PSTBP的结合不能用简单的竞争模型来解释。 2）尝试使用NMR光谱分析DCSTX和PSTBP的结合态，我们在 ^<13> C标记的CO_2的存在下培养了c1，c2，一种C1，C2，一种同源的STX，并用 ^<13> c融合产生的C1，C2。 DCSTX与PSTBP强烈结合，是通过化学转化制备的。当使用HSQC在DCSTX中逐渐将PSTBP逐渐添加到标记的DCSTX中，以跟踪DCSTX ^<13> C和 ^1H的化学位移变化时，DCSTX信号的检测敏感性降低，使DCSTX的交叉峰完全无法检测。据认为，DCSTX在PSTBP期间排斥PSTBP的结合并完全卡住，导致T2降低并降低敏感性。