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ヒガンフグ筋肉ナトリウムチャンネルcDNAの発現とその特性の解析

彼岸河豚肌钠通道cDNA的表达及其特性分析

基本信息

批准号：
10760043
负责人：
山下まり
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760043/
关键词：
ヒガンフグ Na^+チャンネルテトロドトキシン筋肉

项目摘要

ヒガンフグ筋肉Na+チャンネルType2では、全長(6735bp,1880aa)に相当するcDNA断片を得てその塩基配列を決定した。次にそれらの断片の結合を行い、完了した。結合後の塩基配列の確認を2回行った。また、一方、そのアミノ酸配列を基に2種の抗ペプチド抗体を作製した。そのcDNAをT7プロモーターを有する発現ベクター(pcDNA3)に組み込み、ヒト胎児腎臓由来TSA-201細胞にトランスフェクションし、発現を試みたが、現在のところ、抗ペプチド抗体でバンドは検出されていない。この原因として、他のNa+チャンネル研究者から情報を集めたが、これまでも、Na+チャンネルの発現実験では、発現することができない例は多く、翻訳開始部の構造が問題らしい。現在も試行錯誤を繰り返している。一方、nt1376-3302の領域の2箇所において、Alternative splicingがあることが、この領域を含むRT-PCRの結果から判明した。各、クローンの塩基配列の解析から4つのパターンがあり、1のパターンのみ全長の蛋白質をコードしていた。この現象がpseudogeneやmultigeneによらないことは、Southern blotで各制限酵素で1つのバンドしかでなかったことから裏付けられた。発現を試みたcloneはこの部分をRT-PCRから得た断片で全長をコードするように置き換えたが、それが発現しない一つの原因として疑われる。

ヒガンフグNA+チャンネルType2では, the full length (6735bp, 1880aa) is equivalent to the cDNA fragment and the base alignment is determined. The combination of the fragments of the times is the same as the ending. Confirmation of the base alignment after binding is carried out 2 times.また, one side, そのアミノ acid ligand base 2 kinds of anti-ペプチド antibodies are produced by した.そのcDNAをT7プロモーターを有する発成ベクター(pcDNA3)に集团み込み、ヒト fetal 児 kidney 臓 origin TSA-2 01cells In のところ, anti-ペプチドantibodies でバンドは検出されていない.このCauseとして、他のNa+チャンネルResearcher からInformation を集めたが、これまでも、Na+チャンネルの発appear実験では, 発行することができない examplesは多く, and the problem of the structure of the beginning of the translation is らしい. It's now a trial and error process. One party, nt1376-3302の区の2箇所において, Alternative splicingがあることが, この区をcontainsむRT-PCRのRESULTSから见clearした. Each, クローンののみのanalytical から4つのパターンがあり, 1のパターンのみfull-length のprotein をコードしていた.このphenomenonがpseudogeneやmultigeneによらないことは、Southern Each restriction enzyme in the blot is a restriction enzyme.発appearをtrialみたcloneはこのpartをRT-PCRからgetたfragmentでfull-lengthをコードするように出きchangeえたが、それが発appears しない一つのcause としてsuspicious われる.