未解明生体内蛋白質糖化反応および架橋反応生成物の探索と活性評価

未鉴定的体内蛋白质糖化反应和交联反应产物的搜索和活性评价

基本信息

批准号：
17035011
负责人：
山下まり
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17035011/
关键词：
リジルオキシダーゼセミアルデヒドアミナール

项目摘要

1.糖とチオール付加反応生成物の同定と生理活性評価:^<13>Cラベル化グルコース、フルクトースとシステイン、グルタチオンなどの生体内チオールと生体内条件下でインキュベートして生成物を同定した。グルコースとグルタチオンでは、中性状態でインキュベートすると、グルコース1位とシステイン残基のチオールとアミノ基がチアゾリジンを形成し、その後グルタミン酸が加水分解されて安定化することが判明した。この化合物を各種細胞に供したが、特に活性は認められなかった。一方、フルクトースとグルタチオンはチアゾリジンを形成しにくく、ケトースとは体内でも反応しにくいことが推側された。グルコースの場合、このようなアダクトを容易に形成した。これまで、システインとグルコースのアダクトは血液中から同定されているが、グルタチオンのアダクトは追求されてない。このin vitroの反応性から考えて、血中でもシステニルグリシンのグルコースアダクトは存在するものと考えられた。2.酸化蛋白質の架橋反応生成物の解析と活性評価:卵殻膜リジルオキシダーゼは蛋白質架橋反応に関与しているのでその反応特性から調べた。その結果、本酵素はアミノ酸のD, L体の区別なく反応し、アミノ酸のαアミノ基には反応しないで、Lys, Ornなどの1級アミノ酸のみに反応することがわかった。この酵素を用いて、蛋白質酸化モデルのα-N-acyl adipic semialdehyde(AAS)およびα-N-acyl gultamic semialdehyde(GGS)を調整し、各種細胞に供したが特に活性は認められなかった。一方、無保護のD-オルニチン(Orn)に本酵素を反応させると、複雑な混合物を与えたが、NMR解析の結果、プロリンなどの代謝物である、D-pyrroline-5-carboxylate(P5C)を主成分として与えることがわかった。また、この化合物は非常に弱いながら(IC_<50>0.1mM程度)caspase-3を阻害することがわかった。L-Ornからも同じ反応条件でNMRで全くD体と同じ生成物が示されたが、L体はこの活性を示さなかった。このことからCaspase-3阻害活性はD-アミノ酸代謝物の未知の生理活性であることが示唆された。3.蛋白質の酸化程度を定量する方法の確立と応用蛋白質酸化で生じるAAS, GGSをp-aminobenzoic acidで蛍光ラベル化し、イミンを還元後に蛍光HPLCで定量する方法を完成した。

1。对糖和硫醇添加反应产物的鉴定和生物活性评估：通过在体内硫化硫醇（例如C标记的葡萄糖，果糖和半胱氨酸）以及在体内条件下的谷胱甘肽中孵育来鉴定产物。在葡萄糖和谷胱甘肽中，中性状态的孵育表明，葡萄糖位置1以及半胱氨酸残基处的硫醇和氨基基团形成噻唑烷氨酸，然后将谷氨酸水解稳定。该化合物受到各种细胞的影响，但未观察到特定的活性。另一方面，有人建议果糖和谷胱甘肽很难形成噻唑烷类，并且它们很难与体内的酮反应。在葡萄糖的情况下，很容易形成这种加合物。迄今为止，在血液中已经确定了半胱氨酸和葡萄糖加合物，但尚未追捕谷胱甘肽加合物。鉴于这种体外反应性，人们认为血液中存在胱氨2加合物。 2。氧化蛋白的交联反应产物的分析和活性评估：由于蛋壳膜溶氧化氧化氧化物酶参与蛋白质交联反应，因此根据其反应特征进行了研究。结果，发现该酶反应不区分D和L氨基酸，并且不与氨基酸的α-氨基反应，而仅与原代氨基酸（如Lys和Orn）反应。使用这种酶，调整了蛋白质氧化模型α-n-acyl脂肪半二醛（AAS）和α-N-acyl gultamic ggultamic semldedeyde（GGS），并对酶进行各种细胞进行调整，但没有观察到特定的活性。另一方面，当酶与未受保护的D-雌氨酸（ORN）反应时，给出了复杂的混合物，但是NMR分析表明，它被作为主要成分D-吡咯烷-5-羧酸盐（P5C），一种代谢物，例如脯氨酸。此外，尽管该化合物非常弱，但发现它会抑制caspase-3（大约IC_ <50> 0.1 mm）。 L-orn在相同的反应条件下也显示出NMR，但L-orn没有活性。这表明caspase-3抑制活性是D-氨基酸代谢物的未知生理活性。 3。建立一种用于量化蛋白质氧化产生的蛋白质氧化程度以及施用AAS和GGS的方法，用P-氨基苯甲酸荧光标记，并在还原后通过荧光HPLC通过荧光HPLC定量。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Hydrophillc interaction liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry of tetrodotoxin and its analogs

河豚毒素及其类似物的亲水作用液相色谱-电喷雾电离质谱法

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Anal. Biochem (印刷中)
影响因子：
0
作者：
Shigeru Arai;Fumie takahashi;Riichiro Tsuji;Atsushi Nishida;Raphael Ritson-Williams;Toshio Nakagawa
通讯作者：
Toshio Nakagawa

Identification of the cyclic animal forms of α-aminoadipic and γ-glutamic semialdehydes as the major forms in aqueous solution

水溶液中主要形式的 α-氨基己二酸和 γ-谷氨酸半醛的环状动物形式的鉴定

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Peptide Science 2004
影响因子：
0
作者：
Shigeru Arai;Fumie takahashi;Riichiro Tsuji;Atsushi Nishida;Raphael Ritson-Williams;Toshio Nakagawa;Mari Yotsu-Yamashita
通讯作者：
Mari Yotsu-Yamashita

Ecological functions of tetrodotoxin in a deadly polyclad flatworm

DOI：
10.1073/pnas.0506093103
发表时间：
2006-02-28
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Ritson-Williams, R;Yotsu-Yamashita, M;Paul, VJ
通讯作者：
Paul, VJ

Topics in Heterocyclic Chemistry (Spectroscopic study of the structure of zetekitoxin AB)

杂环化学专题（zetektoxin AB 结构的光谱研究）

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Shigeru Arai;Fumie takahashi;Riichiro Tsuji;Atsushi Nishida;Raphael Ritson-Williams;Toshio Nakagawa;Mari Yotsu-Yamashita;Mari Yotsu-Yamashita
通讯作者：
Mari Yotsu-Yamashita