ウイロイド感染により誘導・抑制される宿主遺伝子の解析

类病毒感染诱导和抑制的宿主基因分析

• 批准号: 12052203
• 负责人: 佐野 輝男
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12052203/
• 关键词: ウイロイド; ディファレンシャルディスプレイ法; mRNA発現量

ホップ矮化ウイロイド及びジャガイモspindle tuberウイロイドを各々キュウリとトマトに接種し、接種前及び接種後(28、35日目)の茎葉からmRNAを抽出し、ディファレンシャルディスプレイ法(以下DD法)により、各ウイロイド感染前後で発現レベルに違いの見られたmRNAを特定した。約200種類のプライマーの組み合わせでDD法を行ない、ウイロイド感染前後のmRNA発現レベルの比較を行なった結果、ホップ矮化ウイロイド/キュウリの系では20種類以上、ジャガイモspindle tuberウイロイド/トマトの系では30種類以上のバンドで増幅量に顕著な違いが確認された。その内で、ホップ矮化ウイロイド/キュウリの系では、感染後バンドの濃さが増加したもの、即ちmRNAの転写が活性化したと考えられたものが15種類、逆にウイロイド感染後バンドの濃さが減少したもの、即ちmRNA転写量が抑制されたと考えられたものが9種類検出された。一方、ジャガイモspindle tuberウイロイド/トマトの系では、感染後転写が活性化されたと考えられたものが20種、抑制されたと考えられたものが19種検出された。さらに、両ウイロイド/宿主間で共通に増幅量の違いが認められたものを中心に、増幅バンドを回収し、クローニング後、シークエンスを解析してデーターベース上でホモロジー検索を行なった結果、トマトpsbX mRNA、トマト VFNT Cherr Pto locus内のmRNA、シロイヌナズナDEAD mRNAなどと相補性を示すmRNAであることが確認された。今後、得られたcDNAをプローブとしてノーザン解析を行なって、ウイロイド感染による発現量の変化をより詳細に分析する予定である。

The expression of mRNA in stem and leaf was extracted before inoculation, before inoculation and after inoculation (28th and 35th day). The expression of mRNA in stem and leaf was determined by DD method. About 200 kinds of protein were detected by DD method, and mRNA expression before and after infection was compared. The results showed that more than 20 kinds of protein were detected in the system, and more than 30 kinds of protein were detected in the system. In addition, there are 15 types of mRNA expression that are activated after infection, and 9 types of mRNA expression that are inhibited after infection. The number of active species is 20, and the number of inhibitory species is 19. In addition, the common increase in amplitude between the host and the host is identified as the center, the increase in amplitude, the return, the analysis, and the results of the detection, the psbX mRNA, the VFNT Cherr Pto locus mRNA, the DEAD mRNA, and the complementary mRNA. In the future, we will analyze the expression of cDNA in order to determine the amount of cDNA we can detect.

项目成果

SANO,T.,MIMURA.R.,OHSHIMA,K.: "Phylogenetic analysis of hop and grapevine isolates of hop stunt viroid support a grapevine origin for hop stunt disease"Virus Genes. 21巻1号. 53-59 (2001)

SANO, T., MIMURA.R., OHSHIMA, K.：“啤酒花矮化类病毒的啤酒花和葡萄树分离株的系统发育分析支持啤酒花矮化病的葡萄树起源”病毒基因。 (2001)