蛍光ディファレンシャルディスプレイ法を用いた高血圧成因遺伝子の研究

荧光差异显示法研究高血压致病基因

• 批准号: 13770346
• 负责人: 古川 健治
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770346/
• 关键词: ディファレンシャルディスプレイ法; 高血圧; 遺伝子

本研究の目的は、ヒト高血圧症の発症に関わる遺伝子や、血圧調節に関与する未知の遺伝子を探索することである。家系内に高血圧発症者を持ち、高血圧を発症した患者より検体を採取し、total RNAを用いて蛍光ディファレンシャル法(FDD法)にて比較を行った。3種のアンカープライマーと25種のアービタリープライマーを用いてFDD法を行った結果、高血圧患者において発現量が増大しているcDNA断片が10個と、発現量が低下しているcDNA断片が5個得られたため、これらのcDNA断片を候補cDNA断片としてさらに解析をすすめた。はじめに候補cDNA断片の発現異常を確認するため、ノーザンブロットハイブリダイゼーションを行ったところ、高血圧患者において発現量が増大している候補cDNA断片10個のうち2個で発現異常が確認された。また、発現量が低下している候補cDNA断片5個はいずれも発現異常が確認されなかった。次に、高血圧患者において発現量が増大している候補cDNA断片に対し、配列を決定するためシークエンスを行った。得られた配列は未知のものであり、この候補cDNA断片の全長を得るため、クローン化し、レース法を用いて全長の配列を得た。これらの候補cDNAの発現異常が、通常の高血圧患者において認められる例があり、これを解析中である。また、既知の高血圧に関する遺伝子座位と比較するため、FISH法を用いてこの候補cDNAの遺伝子座位を検索中である。今後、アービタリープライマーの数を増やしさらに新たな候補cDNA断片の探索を行う予定である。また、症例数を増やし、新たな候補cDNA断片の探索を行う予定である。

The purpose of this study is to explore the genetic relationship between hypertension and unknown genetic factors related to blood pressure regulation. Family high blood pressure patients, high blood pressure patients, total RNA, total RNA. 3 kinds of cDNA fragments were detected by FDD method, and 10 cDNA fragments were detected in patients with hypertension, 5 cDNA fragments were detected in patients with hypertension, and 5 cDNA fragments were detected in patients with hypertension. In addition, 10 candidate cDNA fragments and 2 abnormal cDNA fragments were identified in hypertensive patients. 5 candidate cDNA fragments were found to be abnormal due to low detection level. The number of cDNA fragments detected in patients with hypertension increased, and the sequence of cDNA fragments was determined. The full length of the candidate cDNA fragment was obtained by the method of "sequence analysis". The candidate cDNA was found abnormally in normal hypertensive patients. Comparison of known high-pressure cDNA loci and the use of FISH to detect candidate cDNA loci In the future, the number of candidate cDNA fragments will increase. The number of cases increased and new candidate cDNA fragments were explored.