ウイルス抵抗性遺伝子のシグナル伝達経路の解明

Brassica campestrisおよびNicotiana tabacumの発現型ファージcDNAライブラリーを用いて,ToMV MPと相互作用するタンパク質(MIP:MP-interacting protein)のcDNAをウエストウエスタン法でスクリーニングした結果,B.campestris由来のクローンMIP102,MIP105,MIP106およびタバコ由来のMIP204が得られた。これらのうち最も結合力の強いMIP102はArabidopsis thalianaで転写コアクチベーターとして報告されたKELPのホモログであり,A.thalianaのKELP遺伝子産物を用いてもToMVMPとの相互作用が認められた。さらに,これら2種のKELPはいずれもCTMV-WやCMV-OのMPとも相互作用することが判明した。一方、MIP204についても、トマトのエチレン応答遺伝子とのホモロジーが見出され、転写コアクチベーターの1種に属することが判明した。KELPはPR遺伝子の1種PRHAを調節することが報告されており、KELPのような核内因子が細胞質において合成された直後にMPにトラップされて核内への輸送が阻害され、PR遺伝子の発現が何らかの影響を受けることが予想される。現在我々は,ToMVのMP以外に、CMVのCPおよびMPをプローブとして追加し、またTMVに対する抵抗性遺伝子NのTIR,NBS,LRRの各ドメインを含む領域を組換えタンパク質として発現・精製した。これらをプローブとしたウエストウエスタンスクリーニングにより,各種タンパク質と相互作用する細胞因子のcDNAクローンが得られたので,今後はこれらの機能解析を行う予定である。

Brassica campestrisおよびNicotiana tabacumの発現型ファージcDNAライブラリーを用いて,ToMV MPと相互作用するタンパク質(MIP:MP-interacting protein)のcDNAをウエストウエスタン法でスクリーニングした結果,B.campestris由来のクローンMIP102,MIP105,MIP106およびタバコ由来のMIP204が得られた。これらのうち最も結合力の強いMIP102はArabidopsis thalianaで転写コアクチベーターとして報告されたKELPのホモログであり,A.thalianaのKELP遺伝子産物を用いてもToMVMPとの相互作用が認められた。さらに,これら2種のKELPはいずれもCTMV-WやCMV-OのMPとも相互作用することが判明した。一方、MIP204についても、トマトのエチレン応答遺伝子とのホモロジーが見出され、転写コアクチベーターの1種に属することが判明した。KELPはPR遺伝子の1種PRHAを調節することが報告されており、KELPのような核内因子が細胞質において合成された直後にMPにトラップされて核内への輸送が阻害され、PR遺伝子の発現が何らかの影響を受けることが予想される。現在我々は,ToMVのMP以外に、CMVのCPおよびMPをプローブとして追加し、またTMVに対する抵抗性遺伝子NのTIR,NBS,LRRの各ドメインを含む領域を組換えタンパク質として発現・精製した。これらをプローブとしたウエストウエスタンスクリーニングにより,各種タンパク質と相互作用する細胞因子のcDNAクローンが得られたので,今後はこれらの機能解析を行う予定である。