アブラナ科植物の不和合性因子の機能解析

十字花科植物不亲和因子的功能分析

• 批准号: 09262205
• 负责人: 丹生谷 博
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09262205/
• 关键词: Brassica; アブラナ科; 自家不和合性因子; キナーゼ; リン酸化; SRK; 柱頭; 花粉

Brassica属植物の自家不和合性因子のひとつであるSRKについて,大腸菌を利用してキナーゼドメイン(KD)のみを含む領域の単独発現を検討した。可溶性のGST融合型組換えタンパク質(GST-KD)は大量発現され高度に精製でき,自己リン酸化能を有することが判明した。各種キナーゼ阻害剤の効果を検討した結果,プロテインキナーゼCの阻害剤GF-109203Xによる阻害が顕著であった。次に,キナーゼの基質となる標的タンパク質の同定を目的として,GST-KDを柱頭抽出物とインキュベートさせ,柱頭抽出物中のタンパク質に含まれるキナーゼ結合タンパク質を結合させ,バッファーによる洗浄後,^<32>P-ATP存在下でリン酸化反応をさせた。SRK以外に,分子量42,38,26,23,20,および16kDaのリン酸化タンパク質(p42,p38,p26,p23,p20,p16)が検出され,SRK結合性タンパク質候補と考えられた。さらに,これらのSRK結合性タンパク質と既知の各種キナーゼ標品を用いてin vitroでのリン酸化反応を検討した。サイクリックAMP依存プロテインキナーゼはGST-KD,p38を,MAPキナーゼはGST-KD,p42,p38を,cdc-2はp42をリン酸化することが判明し,柱頭抽出物中にはSRKのキナーゼドメインと複合体を形成し,各種キナーゼの基質となりうるタンパク質が含まれ,花粉因子とSLG/SRKの相互作用による情報伝達に関与する可能性が示唆された。現在は,これらの基質タンパク質のcDNAをクローニングするために,柱頭特異的なmRNAを抽出し,cDNAライブラリーを作製している。

A study on the development of Brassica spp. in the field of its own incompatibility factors and the utilization of Escherichia coli Soluble GST fusion protein (GST-KD) was found in large quantities and highly purified, and its acidification ability was identified. The results of the investigation of various resistance agents show that the resistance agent GF-109203X is the most effective. In addition,GST-KD and stigma extracts were identified by the same method, and GST-KD and stigma extracts were identified by the same method. After washing,GST-KD and stigma extracts were acidified in the <32>presence of P-ATP. Except SRK, molecular weight 42, 38, 26, 23, 20, 16kDa protein (p42,p38,p26,p23,p20,p16) was detected,SRK binding protein was detected. Today, the SRK binding properties are discussed in the context of the use of known compounds in vitro. It was found that SRK complex was formed in stigma extract, and the information of pollen factor and SLG/SRK interaction was related to the possibility of formation. Now, the substrate cDNA is extracted and the stigma-specific cDNA is produced.