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ヒトT細胞白血病ウイルスのレセプターの同定とcDNAクローニング

人T细胞白血病病毒受体的鉴定及cDNA克隆

基本信息

批准号：
09670309
负责人：
丹生谷博
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-1)は、ヒトに感染して成人T細胞白血病(ATL)を引き起こすレトロウイルスの一種である。動物ウイルスの宿主への感染は、宿主細胞膜蛋白質のレセプターとウイルスの構造蛋白質が相互作用し、ウイルスが宿主に取り込まれるところから始まる。本研究では、HTLV-1のレセプター検索を目的として、蛋白質-蛋白質間相互作用を解析した。HTLV-1の被膜蛋白質(Env)はgp46とp20から構成されるが、gp46のAsp-166からGlu-201までの領域(AX)は感染中和抗体のエピトープを含むものである。このAX領域と相互作用する宿主蛋白質のcDNAクローニングを行うために、酵母ツーハイブリッド系を利用した。DNA結合ドメインにAXを融合させたプラスミドを酵母細胞に導入したところ、転写活性化ドメインを持つプラスミドを導入しなくともβ-ガラクトシターゼが誘導された。この結果はAX領域に転写活性化能があることを示している。次に、AX領域のサブ領域A(Asp-166〜Ser-182)、M(ile-174〜Pro-190)、X(Pro-185からLeu-200)について同様の活性化能を調べた結果、A領域が蛋白質-蛋白質相互作用能を有することが示されたと同時に、酵母の系でのスクリーニングが困難になったので、次に哺乳類細胞のツーハイブリッドベクターを利用して、同様の実験を行った。転写活性化の指標としてはルシフェラーゼ測定によりアッセイを行った。Jurkat培養細胞株ではAX領域は転写活性化能を示さなかったので、この細胞株を用いてのツーハイブリッド系によりAXと相互作用をする宿主蛋白質(レセプター)のcDNAスクリーニングが可能となった。

T-cell leukemia type I (HTLV-1) is a type of adult T-cell leukemia (ATL). The infection of the host cell membrane protein and the interaction between the host cell membrane protein and the structural protein of the host cell. The purpose of this study is to analyze the protein-protein interaction of HTLV-1. HTLV-1 envelope protein (Env) is composed of gp46 and p20, and gp46 and Asp-166 are composed of Glu-201. This domain interacts with host protein cDNA sequences, and yeast sequences are utilized. DNA binding protein fusion protein is introduced into yeast cells, and DNA activation protein fusion protein is introduced into yeast cells. The result is that the activation energy of AX domain is not enough. Next, AX field and A field (Asp-166 ~ Ser-182), M(ile-174 ~ Pro-190), X(Pro-185 ~ Leu-200), protein-protein interaction energy in domain A, yeast system, mammalian cells, and mammalian cells. The activity of the enzyme is measured by the enzyme. Jurkat culture cell line AX domain is not active, and the cell line is used in the host protein interaction.