自己免疫病誘導モデルを用いた、病態形成に関与する遺伝子の疾患誘導能の解析

使用自身免疫性疾病诱导模型分析参与发病机制的基因的疾病诱导能力

基本信息

批准号：
12204037
负责人：
三崎義堅
金额：
--
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトの実際の病変では病期の進行度、浸潤している細胞の種類、量、活性化状態などの要素が、患者間で極めて多様でかつ、健常人とは非常に異なり、発現遺伝子解析の正確な対照を得ることはほぼ不可能である。また同一の遺伝子異常でも遺伝的背景により表現系が全く異なることもマウスで示されている。従ってそれらの情報まで把握できなければ、多因子病で病態との関連の追及は困難だと考えられる。プリスタンを各種マウス系統に腹腔投与後16週以降に、抗DNA抗体などの自己免疫病標識抗体、関節炎、糸球体腎炎が出現し、この自己免疫病態は系統によって異なる。この系では健常対照と遺伝的背景が明瞭である。そこで自己免疫病態に関与する遺伝子の探索を目的として、この系でのB細胞におけるトランスクリプトームを検討した。プリスタン投与C57BL/6マウスは、20週後血清でほぼ100%と高率に抗U1-A自己抗体を産生していた。投与20-24週後マウスの中でも高力価に自己抗体を産生している3個体から脾臓B細胞を精製分離し、PBS投与マウス由来脾臓B細胞を対照として、蛍光Differential Display法にて解析した。これまで9936バンドを解析し、すべてのプリスタン投与個体由来B細胞にて発現が上昇したもの65、発現が低下したもの54であった。塩基配列を決定した発現上昇クローン20個中、8個が既知、4個がdbESTと一致、未知のものが8個であった。我々は、これまで遺伝子導入が比較的困難とされていたマウス成熟リンパ球にも、レトロウィルスベクターを用いて高効率に遺伝子導入する系を確立した。従って、この手法を用いて候補遺伝子の病態との関連効果をin vitroだけでなくin vivoで観察することが可能である。今後細胞集団の種類も拡大して解析していく予定である。

在实际的人病变中，诸如阶段进展，浸润细胞类型，量和激活状态之类的因素在患者中非常多样化，并且与健康个体的因素非常不同，因此几乎不可能获得对表达基因分析的准确控制。在小鼠中还显示，即使有相同的遗传异常，表达系统也完全不同，具体取决于遗传背景。因此，如果无法掌握此信息，则认为很难与多因素疾病的病理进行关系。在给予各种小鼠菌株的丙烷后16周后，出现自身免疫性疾病标记的抗体，例如抗DNA抗体，关节炎和肾小球肾炎，并且这种自身免疫性病理学因菌株而异。在该系统中，从健康对照中可以清楚地看出遗传背景。因此，我们研究了该系统中B细胞中的转录组，目的是寻找与自身免疫性病理学有关的基因。经pristane治疗的C57BL/6小鼠在20周时以血清的近100％产生抗U1-A自身抗体。纯化脾脏B细胞并与三个个体分离，在给药后20-24周之间在小鼠中产生高滴度自身抗体，并使用荧光差分显示方法分析了源自PBS处理的小鼠的脾B细胞。到目前为止，已经分析了9936个频段，所有经pristane处理的个体的B细胞的表达增加了65和54，表达54。在20个核心素固醇序列确定的富含表达的克隆中，已知8个，4个与DBEST相同，而8个是尚不清楚的。我们已经建立了一个使用逆转录病毒载体有效地将基因转移到成熟小鼠淋巴细胞的系统，以前被认为相对难以传递基因。因此，使用这种技术，可以观察到候选基因与病理学不仅在体外而且体内的相关作用。我们计划将来扩大细胞群体的类型并进行分析。