RNAによる制御性T細胞特異的転写因子機能修飾機構の解明による関節リウマチの治療

阐明RNA对调节性T细胞特异性转录因子的功能修饰机制治疗类风湿性关节炎

• 批准号: 19591157
• 负责人: 三崎 義堅
• 金额: $ 1.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19591157/
• 关键词: 制御性T細胞; 機能性RNA; FOXP3

CD4陽性ヘルパーT細胞のサブセットの一つであるCD4(+)CD25(+)制御性T細胞(以下Treg)は、免疫応答を負に制御し、免疫系のホメオスタシス維持の上で重要な役割を担っている。このTregを新たに誘導あるいは、その細胞数、機能を制御することができれば、生体内のホメオスタシス回復という新しい形の治療が可能になると考えられている。Foxp3はTreg特異的な転写因子であり、その分化及び機能において決定的な役割を果たすことが明かとなっているが、詳細なTreg機能や分化機序との関係は不明である。細胞内発現RNAは、細胞機能修飾に関わっているのではないかと考えられ始めており、分子会合して機能するものも見つかり始めている。そこで、この研究ではFOXP3の機能を修飾する機能性RNAを解析することとした。このFoxp3のパートナーを2酵母ハイブリッド法を用いて探索する研究過程で、open reading frameが極めて短いcDNA断片クローン3AB19は最も高頻度に検出されてくる。このcDNAクローンは178bpからなるがストップコドンが多数あり、Ga14タンパクADドメインとの融合タンパクとしての読み枠でも規定するアミノ酸長が極めて短い。このクローンはゲノム解析では、イントロン領域の相補鎖に相当する領域とされ、転写されないはずであるが、TregにおいてRNAとして転写されていることを確認した。次に32Pで標識した3AB19RNAとFOXP3とが結合することをin vitroにて確認した。さらに、Jurkat細胞に遺伝子導入してanti-CD3/anti-CD28抗体刺激におけるIL-2産生能を調べたところ、FOXP3と3AB19RNAを同時に導入した場合、IL-2産生が60%以上抑制された。Jurkat細胞ではFOXP3単独ではIL2産生抑制が観られないので、FOXP3本来の機能を3AB19は復活させることができたわけである。本来はタンパクとして発現して始めて検出できる実験系の2酵母ハイブリッド法において、タンパク質との複合体として働くRNAも検出できると報告されている(Lanz RB, Cell, 17; 1999)。以上より、3AB19RNAはTregにおいて、FOXP3と結合してその機能遂行上重要な役割を果たしていることが推定された。研究は途中まで順調であったが、研究責任者が臨床病院に転出のため、この研究は中止せざるを得なくなった。

CD4 positive ヘ ル パ ー t-cell の サ ブ セ ッ ト の a つ で あ る CD4 (+) CD25 (+) T cells (Treg) suppression sex は, immune 応 a royal し を negative に system, immune system の ホ メ オ ス タ シ ス maintain の で important な "を cut bear っ て い る. こ の Treg を new た に induced あ る い は, そ の cell number and function を suppression す る こ と が で き れ ば, born in vivo の ホ メ オ ス タ シ ス reply と い う new し い form の が treatment can に な る と exam え ら れ て い る. Foxp3 は Treg specific な planning write factor で あ り, そ の differentiation and function of び に お い て decided to cut を な service fruit た す こ と が Ming か と な っ て い る が, detailed な Treg function や differentiation machine sequence と の masato is unknown は で あ る. Intracellular は 発 now RNA, cell function modified に masato わ っ て い る の で は な い か と exam え ら れ beginning め て お り meet, molecular し て function す る も の も see つ か り beginning め て い る. そ こ で, こ の research で は FOXP3 の function を modified す る functional RNA を parsing す る こ と と し た. こ の Foxp3 の パ ー ト ナ ー を 2 yeast ハ イ ブ リ ッ を ド method with い て explore す る で research process, the open reading frame が め extremely short て い cDNA fragment ク ロ ー ン 3 ab19 は も most high frequency に 検 out さ れ て く る. こ の cDNA ク ロ ー ン は 178 bp か ら な る が ス ト ッ プ コ ド ン が most あ り, Ga14 タ ン パ ク AD ド メ イ ン と の fusion タ ン パ ク と し て の 読 み 枠 で す も regulations る ア ミ ノ acid が extremely long め て short い. こ の ク ロ ー ン は ゲ ノ ム parsing で は, イ ン ト ロ ン field の fill phase lock に quite す る field と さ れ, planning to write さ れ な い は ず で あ る が, Treg に お い て RNA と し て planning write さ れ て い る こ と を confirm し た. Time に 32 p で logo し た 3 ab19rna と FOXP3 と が combining す る こ と を in vitro に て confirm し た. さ ら に, Jurkat cells に heritage 伝 son import し て anti - CD3 / anti - CD28 antibody stimulation に お け る IL - 2 could produce を べ た と こ ろ, FOXP3 と 3 ab19rna を simultaneously に import し た occasions, more than 60% が IL - 2 produced suppression さ れ た. Jurkat cells で は FOXP3 単 alone で は IL2 suppressing が 観 ら れ な い の で, FOXP3 was の functional を 3 ab19 は resurrection さ せ る こ と が で き た わ け で あ る. Originally は タ ン パ ク と し て 発 し now beginning て め て 検 out で き る be 験 is の 2 yeast ハ イ ブ リ ッ ド method に お い て, タ ン パ ク qualitative と の complex と し て 働 く RNA も 検 out で き る と report さ れ て い る (Lanz RB, Cell, 17, 1999). Above よ り, 3 ab19rna は Treg に お い て, FOXP3 と combining し て そ の function carries out on important な "を cut fruit た し て い る こ と が presumption さ れ た. Research way は ま で suitable adjustable で あ っ た が, research responsible が に clinical hospital planning out の た め, こ の research は suspended せ ざ る を must な く な っ た.

项目成果

Polymyositis associated with focal mesangial proliferative glomerulonephritis with depositions of immune complexes.

与局灶性系膜增生性肾小球肾炎相关的多发性肌炎，伴有免疫复合物沉积。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Clin Rheumatol. 26(5)
• 作者: Takizawa Y;Kanda H;Sato K;Kawahata K;Yamaguchi A;Uozaki H;Shimizu J;Tsuji S;Misaki Y;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Severe airflow limitation in two patients with systemic lupus erythematosus: effect of inhalation of anticholinergics.

两名系统性红斑狼疮患者严重气流受限：吸入抗胆碱能药物的影响。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Mod Rheumatol. 18(1)
• 作者: Kawahata K;Yamaguchi M;Kanda H;Misaki Y;et. al.
• 通讯作者: et. al.