ホルマリン固定・パラフィン包埋病理組織を用いた包括的エピジェネシス解析

使用福尔马林固定、石蜡包埋的病理组织进行全面的表观发生分析

• 批准号: 12204076
• 负责人: 北澤 荘平
• 金额: --
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204076/
• 关键词: 遺伝子プロモータ; CpGメチル化; 病理組織検体; BMP-6; サイクリンD1; 悪性腫瘍

ヒトゲノム解読の後には遺伝子発現制御機構の解析が重要性を増すことが予想される。私どもはラットのサイクリンD1遺伝子5′側上流領域をクローニングし、白血病細胞のサイクリンD1発現がプロモータ領域のCpGメチル化によってEpigeneticalに制御されることを示した。さらにCpGメチル化を組織形態と対応して解析するために、病理組織検体からCpGメチル化を検出する方法の基礎的検討を行った。即ち、ホルマリン固定パラフィン包埋の薄切標本をアガローズビーズに封入してDNAの化学的修飾やPCR・DNAシーケンスを行うことにより、微量検体からのCpGメチル化検出を可能にした(Lab Invest2000)。また、ヒト前立腺癌においてBMP-6遺伝子プロモータ領域のメチル化がBMP-6の転写を制御することを示し、前立腺癌の手術・剖検症例を用いた検索を行った。BMP-6mRNAは低分化型腺癌に高率に発現するとともに他臓器の転移浸潤部位では発現が高い傾向を示したが、micro dissectionで切出した腫瘍組織を用いてCpGメチル化の解析を行い、BMP-6発現がプロモータのSp1結合配列近傍のCpGメチル化によって制御されることを報告した(J Bone Miner Res,in press)。腫瘍の増殖・進展過程でCpGメチル化の変化により遺伝子発現(あるいは発現抑制)を来たし、転移浸潤に関わる生物学的特性を獲得する可能性が示唆された。私どもの方法論により、組織像に着目して標本の任意の部位で対象遺伝子のCpGメチル化の解析を行い「組織形態と対応した遺伝子制御研究」を進めるとともに、病理組織検体として集積されたゲノム資源を活用して疾患病態の解明を行うことが可能になる。以上の成果は第89回日本病理学会総会ワークショップ、第23回IAP総会シンポジウムにて発表した。

The importance of the analysis of the mechanism for the development and control of information technology has increased. The 5′ side upstream domain of the D1 gene is the most important domain in leukemia cell development. The CpG gene in the D1 gene is the most important domain in leukemia cell development. This paper discusses the basic methods of CpG histochemistry analysis and pathology. That is to say, the chemical modification of DNA, PCR and DNA synthesis, and the possible detection of CpG in micro-samples (Lab Invest2000). The study of BMP-6 gene expression in prostate cancer was carried out in the field of breast cancer. BMP-6mRNA is highly expressed in poorly differentiated adenocarcinomas and tends to be highly expressed in metastatic and invasive sites of other organs. Microdissection is used to isolate tumor tissues and analyze CpG protein. BMP-6 mRNA is expressed in CpG protein near Sp1 binding sites and is controlled by CpG protein (J Bone Miner Res,in press). The growth and development of CpG in the tumor indicates the possibility of obtaining biological characteristics related to migration and infiltration. The methodology of tissue imaging and analysis of CpG molecules in any part of the tissue is discussed in the "tissue morphology and molecular control study". The accumulation of tissue and the use of resources in the diagnosis of pathological diseases are possible. The above results were presented at the 89th meeting of the Japanese Pathological Society and the 23rd meeting of the Japanese Pathological Society.

项目成果

北澤荘平 他: "免疫組織化学とin situ hybridizationのすべて:非放射性プローブ."病理と臨床. 18・臨時増刊号. 245-251 (2000)

Shohei Kitazawa 等人：“关于免疫组织化学和原位杂交：非放射性探针。”18/特刊 245-251 (2000)。

Tamada H et al: "Methylation of CpG island of human bone morphogenetic protein-6 gene promoter alters its steady-state expression in prostatic lesion."J Bone Miner Res. (in press).

Tamada H 等人：“人骨形态发生蛋白 6 基因启动子的 CpG 岛甲基化改变了其在前列腺病变中的稳态表达。”J Bone Miner Res。

Yano S et al: "Association of decreased calcium-sensing receptor expression with proliferation of parathyroid cells in secondary hypreparathyroidism."Kidney Int. 58・11. 1980-1986 (2000)

Yano S 等人：“继发性甲状旁腺功能亢进症中钙敏感受体表达减少与甲状旁腺细胞增殖的关联”，Kidney Int. 58・11 1980-1986 (2000)。

Sakamoto Y et al: "Methykation of CpG loci in 5'-flanking region alters steady-state expression of adenomatous polyposis gene in colon cancer cell line."J Cell Biochem. (in press).

Sakamoto Y 等人：“5 侧翼区域 CpG 位点的甲基化改变了结肠癌细胞系中腺瘤性息肉病基因的稳态表达。”J Cell Biochem。

Takeuchi K et al: "Immunohistochemical detection of PTHrPi in a squamous cell carcinoma arising from mature cystic teratoma causinh humoral hypercalcemia of malignancy."Gynecol Oncol. 79・3. 504-507 (2000)

Takeuchi K 等人：“对由成熟囊性畸胎瘤引起的恶性体液高钙血症进行的 PTHrPi 的免疫组织化学检测。”Gynecol Oncol 79·3 (2000)。