病原性結核菌強毒株H37Rvプロモーターのシステマティックな総合的検索

结核分枝杆菌强毒株H37Rv启动子的系统综合检索

• 批准号: 12206077
• 负责人: 荒牧 弘範
• 金额: --
• 依托单位: Daiichi University, College of Pharmaceutical Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206077/
• 关键词: 結核菌; ゲノム; プロモーター; RNAポリメラーゼ; 固定化酵素; バイオインフォーマティックス

病原性結核菌強毒株M.tuberculosis H37Rvの全ゲノム塩基配列が決定されたが、この株は転写開始因子(シグマ因子)が異なる13種のRNAポリメラーゼをもつなど複雑な転写様式をもつ。本研究の目的は、エマージング感染症の一つの原因菌であり、取り扱いが危険なこの結核菌強毒株のプロモーターを、生化学とバイオインフォーマティックスとを総合的に利用することにより、実用的で危険の無い固定化酵素を利用した新手法で探索することである。この研究で得られる結果は結核菌の転写機構の一般的な理解のみに止まらず、現在まだ不明である病原性にかかわる遺伝子の転写機構を明らかにして感染症の制御やワクチン開発の基盤をあたえる意義をもつと同時に、本研究の新手法は他の病原性バクテリアにそのまま利用できる一般性をもつものである。本年度において、M.tuberculosisのσ70(遺伝子sigA)型のRNAポリメラーゼを大腸菌発現系を用いて精製し、新たに開発したオキシラン系の固定化樹脂(ホロ酵素の吸着がよく、DNAに対して非特異的な結合が少ない)と結合させ、固定化RNAポリメラーゼを調製した。調製した固定化ホロ酵素がプロモーター検索用として有効であるかをsigAの5'上流DNA断片(プロモーターDNA)とsigA内のDNA断片(非プロモーターDNA)を用いて実験を行なった。その結果、この固定化ホロ酵素によりsigAのプロモーターを含むDNA断片からのみ転写産物を得ることができた。現在、調製した固定化ホロ酵素(σ70型)の系で、ゲノムでの出現頻度から設計したプライマーを用いPCRによって構築したM.tuberculosisのゲノムライブラリー用いて、プロモーターのシステマティックな総合的検索を検討中である。

The nucleotide sequence of virulent M.tuberculosis H37Rv is determined by the sequence initiation factor of 13 different RNA sequences. The purpose of this study is to explore new methods for the utilization of the pathogenic bacteria and the immobilized enzymes of the virulent strains of Mycobacterium tuberculosis The results of this study include a general understanding of the mechanism of TB infection, a general understanding of the mechanism of TB infection, and a new approach to the development of TB infection. This year, the R. coli development system of M.tuberculosis and σ70(gene sigA)-type RNA molecules was refined and newly developed, and the immobilized resin of R. coli system (adsorption of enzymes, DNA molecules, non-specific binding), binding and modulation of immobilized RNA molecules were developed. Immobilized enzymes are used to modulate DNA fragments in the 5'upstream of sigA and DNA fragments in sigA. As a result, the immobilized enzyme was found to contain DNA fragments. Now, the system, frequency, design and application of immobilized enzyme (σ70-type) are discussed.

项目成果

M.Fujita: "In vitro transcription system using reconstituted RNA polymerase (Esigma(70), Esigma (H), Esigma (E) and Esigma (S)) of Pseudomonas aeruginosa."FEMS Microbiol.Lett.. 183・2. 253-257 (2000)

M.Fujita：“使用铜绿假单胞菌的重组 RNA 聚合酶（Esigma（70）、Esigma（H）、Esigma（E）和 Esigma（S））的体外转录系统。”FEMS Microbiol.Lett.. 183・2。 -257 (2000)

T.Kawashima: "Archaeal adaptation to higher temperatures revealed by genomic sequence of Thermoplasma volcanium."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 97・26. 14257-14262 (2000)

T.Kawashima：“火山热原体基因组序列揭示了古细菌对更高温度的适应”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97・26（2000）。