权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

蛋白質セラピー法による興奮性ニューロン死の防止と新しい脳保護薬創出の試み

尝试利用蛋白质疗法预防兴奋性神经元死亡并创造新的脑保护药物

基本信息

批准号：
12210111
负责人：
松井秀樹
金额：
--
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210111/
关键词：
蛋白質セラピー In vivo Protein Transduction TAT Aキナーゼ長期増強 PKI

项目摘要

目的と方法:In vivo Protein Transduction(生体内蛋白導入法)はエイズウイルスTAT蛋白質の11個のアミノ酸からなるペプチド配列(TATペプチド)をN末端に結合させることにより、目的の蛋白質やペプチドを血液脳関門を越えて脳内ニューロンにin vivo導入させる画期的な方法である。(Schwarze et al.Science,285,1569-72,1999)この方法を応用し、生理活性ペプチドを細胞内に直接導入する事を目的として研究を行った。(1)まずこのTATペプチドの導入効率を確認すると共にその中枢神経に対する作用の有無を検索した。(2)次にTATに代わる新たな導入ペプチド(11R、9R、7R)を試作しその効率をTATと比較した。(3)さらに、11Rのペプチドを利用して脳スライス内の神経細胞に生理活性ペプチド導入する事を試みた。(4)また、上記の方法で導入した活性ペプチドを神経細胞の核内に限局させることを試みた。結果と考察:11RはTATに比べ導入効率がはるかに高かった。Rの数が少なくなると効率は低下した。TATは海馬スライスのLTP誘導に強い抑制作用を示したが、11Rにはそのような作用は全く見られなかった。11Rでは培養細胞のみならず海馬スライスにも高率に導入することが出来た。SV40の核内導入ペプチドを11RのN末端側に付けると培養細胞、海馬スライスいずれににおいても選択的に神経細胞の核内に選択導入することが可能であった。Aキナーゼの特異的抑制ペプチド(PKI)を海馬スライスの核内に導入したところLTP形成には全く影響がなく、L-LTPの形成のみが抑制された。以上のことから11R法はTATに比べ遙かに優れており脳の電気生理的機能解析や蛋白質導入による新しい脳保護薬創出には最適の方法であると結論した。

Objective:In vivo Protein transfer (in vivo protein transfer method) is a new method for protein transfer in vivo. (Schwarze et al. Science, 285, 1569 - 72, 1999). This method was used to investigate the direct introduction of physiological activity into cells. (1)To confirm the effect of TAT on the central nervous system (2)The next generation is TAT (11R, 9R, 7R). (3)In addition, 11R can be used to test the physiological activity of neurons. (4)The method described above is to introduce the nuclear restriction into the brain. Results:11R TAT introduced rate is higher. The number of R is low. TAT hippocampus and LTP induced strong inhibitory effect, 11R and 11R induced strong inhibitory effect. 11. The cells in culture were introduced into the hippocampus at a high rate. SV40 intraruclear transfer from the N-terminal side of the 11R to cultured cells, hippocampus, and selected neurons is possible. A specific inhibition of LTP formation in the hippocampus was observed. The above results show that TAT is the most suitable method for the analysis of protein introduction and the creation of new protective agents.