新しい蛋白質セラピー法の展開と脳保護薬創出

开发新的蛋白质治疗方法并创制脑保护药物

• 批准号: 13210099
• 负责人: 松井 秀樹
• 金额: $ 4.93万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210099/
• 关键词: 蛋白質セラピー; In vivo Protein Transduction; TAT; Aキナーゼ; 長期増強; PKI

興奮性神経細胞死におけるカルシウム依存性蛋白分解酵素(カルパイン)の役割を検索した。カルパインは生理的カルパイン阻害剤であるカルパスタチン(CS)により強力に抑制される(IC50=20nM)。このペプチドを蛋白質セラピー法により細胞内に導入し、その導入効率や細胞死の抑制効果について検討した。海馬培養神経細胞および海馬スライスに1μM11R-CS peptideを添加すると、3時間以内にすべての神経細胞内に導入できた。また、同ペプチドの添加により、グルタミン酸で誘導される神経細胞死が有意に抑制された。以上より、11R-CS peptideが、膜通過性神経細胞死抑制ペプチドとして、今後の創薬の発展が期待できることが示唆された。さらに蛋白質セラピー法を利用してカルシニューリン(CaN)を介する神経細胞死のカスケードを解析した。免疫細胞系においてCaNはCa^<2+>イオン情報により活性化され、細胞内NF-ATを脱リン酸化してインターロイキン産生を引き起こす。この機構が興奮性神経細胞死にどの様に働くかを解析するためCaN-NFAT相互作用の特異的阻害ペプチドであるVIVITを蛋白質セラピー法で神経細胞内に導入した。その結果11R-VIVITは興奮性神経細胞死を促進した。この結果からCaN-NFATカスケードが神経細胞死抑制系として働くことが明らかとなった。

Excitatory neurocyte death is the result of the activation of a protein-dependent enzyme. A strong inhibition of physiological inhibition (IC50 =20nM). The protein pathway of this species is described in terms of intracellular introduction, efficiency of introduction, and inhibition of cell death. Hippocampus cultured neurons were introduced into hippocampus cells within 3 hours after 1μ M 11R-CS peptide was added. In addition, the addition of the same protein and the inhibition of neuronal cell death induced by the same protein The above, 11R-CS peptide, membrane-permeable neurocytopathic inhibition, and future development of the drug are expected. In addition, the protein level analysis method is used to analyze the protein level in the brain. In immune cell lines, CaN is activated by Ca^<2+> and NF-AT is activated by Ca ^<2 +>. The mechanism for the analysis of excitatory neuronal cell death is the specific inhibition of the CaN-NFAT interaction. 11R-VIVIT promotes the death of excitatory neurons. The result is CaN-NFAT, which inhibits neuronal cell death.

项目成果

Tomizawa, K., Ohta, J.et al.: "Cdk5/P^<35> regulates neurotransmitter release through phosphorylation and downregulation of P/Q-type voltage-dependent calcium channel activity"J.Neurosci.. (in-press).

Tomizawa, K., Ohta, J.等人：“Cdk5/P^<35> 通过磷酸化和下调 P/Q 型电压依赖性钙通道活性来调节神经递质释放”J. Neurosci..（出版中）

Matsushita, M., Tomizawa, K, et al.: "A high efficiency protein transduction system proving the role of PKA in long lasting LTP"J.Neurosci.. 21(16). 6000-6007 (2001)

Matsushita, M., Tomizawa, K, 等人：“一种高效的蛋白质转导系统证明了 PKA 在持久 LTP 中的作用”J. Neurosci.. 21(16)。

Kurazono, S., Okamoto, M, et al.: "Recombinant core protein fragment of phosphacan, a brain specific chondroitin sulfate proteoglycan, promote excitotoxic cell death of cultured rat hippocampal neurons"Neurosci.Lett.. 304(3). 169-172 (2001)

Kurazono, S.、Okamoto, M 等人：“磷酸聚糖（一种脑特异性硫酸软骨素蛋白聚糖）的重组核心蛋白片段，促进培养的大鼠海马神经元的兴奋毒性细胞死亡”Neurosci.Lett.. 304(3)。

Kurazono, S., Okamoto, M, et al.: "Expression of brain specific chondroitin sulfate proteoglycans, neurocan and phosphacan, in the developing and adult hippocampus of Ihara's epileptic rats"Brain Res.. 898. 36-48 (2001)

Kurzono, S., Okamoto, M, 等人：“Ihara 癫痫大鼠发育中和成年海马中脑特异性硫酸软骨素蛋白聚糖、神经聚糖和磷酸聚糖的表达”Brain Res.. 898. 36-48 (2001)

松井 秀樹, 的崎 尚: "蛋白質 核酸 酵素"共立出版. 4 (2001)

松井英树、友崎隆：“蛋白质、核酸、酶”共立书刊 4 (2001)。