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小脳皮質の生後発達における分子神経生物学的研究

小脑皮质出生后发育的分子神经生物学研究

基本信息

批准号：
12210152
负责人：
古市貞一
金额：
--
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

小脳皮質のシナプス形成や機能に重要な縦割り構造の形成メカニズムについてはよくわかっていない。本研究では、1)シナプス後肥厚部において複数のシグナル伝達分子(mGluR1、IP_3R1、drebrin、Cdc42など)をリンクするアダプター蛋白質cupidinの小脳発達期における発現と後シナプスでの役割の解析、2)傍矢状方向に沿って分布する発達中のプルキンエ細胞亜集団に特異的なlacZ遺伝子の帯状発現の解析、からこれらの分子メカニズムの解明に迫ることを目的とした。小脳顆粒層でのcupidinの局在は生後7日をピークにその後の発達に伴って減少した。初代培養系のGCにおいても、培養7日目では抗cupidin抗体の免疫染色反応が神経突起上に斑点状に観察されたが、21日目ではかなり減少した。培養7日目のGCをグルタミン酸(20μM Glu)で刺激すると、cupidin陽性斑点はNMDARを介したCa^<2+>influxに依存的に1分以内に消失した。これらのことから、cupidinは生後発達中のGCの後シナプスに局在して、アクチン骨格系と相互作用することで後シナプス形成に関与する。また、シナプス結合の完成とともにシナプス伝達依存的にその局在が変動する、ことが示唆された。IP_3R1 promoter-lacZトランスジェニックマウス(1NM13系統)の小脳皮質では、矢状方向に分布する特定のPC亜集団でのみlacZ遺伝子が帯状に発現する。帯状分布が良く知られているzebrin IIと比較したところ、1NM13のlacZ+帯域は一部はzebrin II+帯域と一致したが、全体的に幅広で異なる帯域が多いことがわかった。El4.5小脳の冠状断切片では移動中と移動後のPCがX-gal弱染色され、El5.5ではlacZ+とlacZ-のPC亜集団がすでに存在することがわかった。以上のことから、胎生期において、脳室面におけるPC前駆細胞の分裂前後(あるいは移動開始直後)にはすでにPCはlacZ+とlacZ-の亜集団に区分化されていて、このような遺伝子発現が異なるPC亜集団が複数存在することが示唆された。

The formation of small cortex is important for the formation of structure. In this study, we found that: 1) the number of molecules in the post-hypertrophic part of the brain (mGluR1, IP_3R1, dreblin, Cdc42), 2), analysis of the occurrence and post-occurrence of protein cupidins in small cell groups distributed along the sagittal direction, 3), analysis of the occurrence and post-occurrence of specific lacZ proteins in small cell groups distributed along the sagittal direction, The answer to this question is: The cupidin of the granular layer decreased after 7 days of birth. In the primary culture line, the immunostaining reaction of anti-cupidin antibody was observed on the 7 th day and decreased on the 21 st day. After 7 days of incubation, the GCs were stimulated by 20μM Glu, and the cupidin-positive spots disappeared within 1 minute of Ca^<2+> flux dependence. The relationship between the formation of GC and the interaction between the two systems is discussed. The system of the system of the system IP_3R1 promoter-lacZ promoter pattern (1NM13 system) was found in the microcortex of a specific PC cluster in both sagittal and lateral directions. Zonal distribution is well known. Zeblin II is compared with 1NM13 and the Z + zone is partially equal to zeblin II. The Z + zone is different from the Z + zone. El4.5 small coronal slice is moved, PC X-gal is weakly stained, El5.5 lacZ+ lacZ-PC X-gal is weakly stained. Before and after the division of PC cells (after the start of migration), PC cells were divided into two groups: lacZ+ and lacZ-.