小脳の分子構築にかかわる新規遺伝子群のポストゲノム的解析

参与小脑分子结构的新基因组的后基因组分析

• 批准号: 13202071
• 负责人: 古市 貞一
• 金额: $ 3.46万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13202071/
• 关键词: 小脳; 発生・分化; 遺伝子発現; プロテオーム; マイクロアレイ; 蛍光ディファレンシャルディスプレイ; Gene Chip

本研究では、マウス小脳の分子構築を解明するため、ゲノムワイドなアプローチによりマウス小脳形成に特異的な遺伝子の体系化を行い、小脳形成にかかわる新規遺伝子の探索とその構造・機能の解析を行った。本年度は、蛍光ディファレンシャル・ディスプレイ法(FDD法)やcDNAマクロアレイ法などによって、マウス小脳形成期に特異的に発現する遺伝子群の探索を行った。現在までにFDD反応物を約12,000個解析して(理研ゲノム・服部先生との共同研究)、発達ステージ特異的な遺伝子を約2,000個クローニングした。さらにAffymetrix社製GeneChipを用いて、小脳形成に特異的な遺伝子を約800抽出することにも成功した。単離した小脳形成に特異的な遺伝子群の発現プロファイルをRT-PCR法によりさらに解析し、遺伝子発現タイムテーブルの作製を行った。今後はin situ hybridization(ISH)法による遺伝子発現ブレインマップの作製をめざす。また、オリゴキャップ法で作製した小脳発達期特異的な完全長cDNAライブラリー(東大医科研・菅野先生との共同研究)を用いて、新規遺伝子のクローニングとその構造、機能、発現の解析を行う。これらの遺伝子産物に対する特異抗体を作製して、たんぱく質機能を解析する。さらに、小脳形成遺伝子(約2,400)を用いて、脳形成遺伝子マイクロアレイの作製とその応用を行う。

This study で は, マ ウ ス small 脳 の molecules to construct を interpret す る た め, ゲ ノ ム ワ イ ド な ア プ ロ ー チ に よ り マ ウ ス 脳 formation に な of specific systematic 伝 son の を い, small 脳 form に か か わ る new rules but 伝 son の explore と そ の line structure, function analytical を の っ た. This year は 蛍 light デ ィ フ ァ レ ン シ ャ ル · デ ィ ス プ レ イ method (FDD) や cDNA マ ク ロ ア レ イ method な ど に よ っ て, マ ウ ス small 脳 formation に specific に 発 now す る heritage 伝 subgroup の exploration line を っ た. Now ま で に FDD anti 応 content about 12000 parsing を し て (riken ゲ ノ ム, Mr Hattori と の joint research), 発 ス テ ー ジ な of specific about 2000 ク 伝 son を ロ ー ニ ン グ し た. さ ら に Affymetrix GeneChip club system を with い て, small 脳 form に な of specific 伝 son を about 800 drew す る こ と に も successful し た. Small 単 from し た 脳 form に な of specific 伝 subgroup の 発 now プ ロ フ ァ イ ル を rt-pcr method に よ り さ ら に parsing し, but 伝 発 now タ イ ム テ ー ブ ル の cropping を line っ た. Future は the in situ hybridization (ISH) method に よ る heritage 伝 son 発 now ブ レ イ ン マ ッ プ の cropping を め ざ す. ま た, オ リ ゴ キ ャ ッ で プ method for system し た small 脳 発 long phase of specific な completely cDNA ラ イ ブ ラ リ ー (neusoft medical scientific research, Mr Kanno と の joint research) を with い て, new rules but 伝 の ク ロ ー ニ ン グ と そ の structure, function, and resolution of 発 now の う を line. こ れ ら の heritage 伝 zi chan content に す seaborne る specific antibodies を cropping し て, た ん ぱ く mass function analytical す を る. さ ら に, small 脳 form heritage 伝 child (about 2400) を い て, 脳 form but 伝 マ イ ク ロ ア レ イ の cropping と そ の 応 う by を line.

项目成果

中村 浩: "小脳の生後発達を導くトランスクリプトーム機構 生体の科学 第52巻"財団法人金原一郎記念医学医療振興財団/医学書院. 7 (2001)

Hiroshi Nakamura：“指导小脑产后发育的转录组机制。生物体科学，第 52 卷”金原一郎医疗促进纪念基金会/Igaku Shoin 7 (2001)。

Kagami, Y.: "Investigation of differentiaily expressed genes during the development of mouse cerebellum"Brain Research Gene Expression Patterns. 1. 39-59 (2001)

Kagami, Y.：“小鼠小脑发育过程中差异表达基因的调查”脑研究基因表达模式。

Iwasaki, H.: "Molecular characterization of the Starfish IP3 receptor an its role during oocyte maturation and Fertilization"J. Biol. Chem.. (in press). (2002)

Iwasaki, H.：“海星 IP3 受体的分子特征及其在卵母细胞成熟和受精过程中的作用”J.

Uchiyama, T: "A novel recombinant hyper-affinity lnositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) absorbent traps IP3, resulting in specific inhibition of IP3-mediated calcium signaling"J. Biol. Chem.. (in press). (2002)

Uchiyama, T：“一种新型重组超亲和力肌醇 1,4,5-三磷酸 (IP3) 吸收剂捕获 IP3，从而特异性抑制 IP3 介导的钙信号传导”J.

吉川文生: "哺乳類脳の形成と遺伝子 日本生化学会 バイオサイエンスの新世紀 第11巻 脳の発生・分化・可塑性"共立出版(印刷中). (2002)

Fumio Yoshikawa：“哺乳动物大脑形成和基因，日本生物化学学会，生物科学新世纪，第 11 卷：大脑发育、分化和可塑性”，Kyoritsu Shuppan（印刷中）。