発がん化防御に関わるXPBおよびXPD遺伝子における変異の分子病態

XPB和XPD基因突变参与致癌保护的分子发病机制

基本信息

批准号：
12213121
负责人：
久武幸司
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213121/
关键词：
転写因子バキュウロウイル DNA修復転写 TFIIH プロモーター

项目摘要

1 GAL4-VP16による転写活性化でのERCC3ヘリカーゼ活性の役割組換え体TFIIHの再構成系を用いてTFIIHの変異体を作成し、GAL4-VP16による転写活性化ではXPBヘリカーゼ活性が非常に重要な役割をしていることが明かとなった。XPBヘリカーゼは基本転写ではpromoter openingとpromoter escapeの段階で作用しているが、GAL4-VP16による転写活性化ではどこで作用しているこかを検討した。まず、premeltした鋳型を用いて転写活性化反応を行いTFIIHの変異体の影響を検討した。この結果、転写活性化の際にTFIIHが関与するのはpromoter escapeの段階であることが分かった。またこの作用は基本転写で見られるTFIHの役割とは異なり、転写活性化に特異的である。実際、種々の変異プロモーターを用いて、転写をごく初期の段階で止め、promote escapeの段階で転写活性化の効果が見られるかどうかを調べると、転写のごく初期に転写活性化因子が作用していることが分かった。この、作用には転写活性化因子のみならず、転写補助因子PC4も必要である。この転写のごく初期の段階では、RNA polymerase IIはまだ安定に転写を行っていないようであり、abortiveな転写に終わることが多い。実際、ATPのアナログを用いて、転写のごく初期の段階でXPBの活性を止めると、RNApolymerase IIはpromoterから離れてしまう。以上のことより、転写の活性化にはpreinitiation complexの形成を促進するだけではなく、promoter escapeを促進することが重要であることが分かった。2 DNA除去修復におけるTHIIHの役割TFIIHを用いたヌクレオチド除去修復系を用いるとTFIIHの依存性にin vitroで修復反応が認められる。TFIIHのキナーゼを欠いた変異体は、野生型TFIIHに比べて修復活性が強いようである。現在この系を用いてTFIIH特にそのキナーゼ活性と修復の関係を調べており、TFIIHのキナーゼ活性がNERに抑制的に働いていることが想像される。

1使用重组TFIIH重建系统创建了ERCC3解旋酶活性在GAL4-VP16转录激活中的作用，并且揭示了XPB解旋酶活性在GAL4-VP16中通过转录激活而在转录激活中起着非常重要的作用。 XPB解旋酶在启动子打开和启动子逃脱阶段的作用，但我们研究了GAL4-VP16转录激活时的作用。首先，使用预删除的模板进行了转录激活反应，以检查TFIIH突变体的效果。结果，发现TFIIH参与启动子逃生阶段的转录激活。此外，与基本转录中的TFIH的作用不同，这种效果特定于转录激活。实际上，当使用各种突变体启动子在很早的阶段停止转录，并检查是否在升级逃生阶段观察到转录激活效应时，发现转录激活因子在转录中很早就起作用。此动作不仅需要转录激活因子，还需要转录辅因子PC4。在转录的早期阶段，RNA聚合酶II似乎并不稳定，通常导致流产性转录。实际上，使用ATP的类似物在转录的早期阶段停止XPB活性，rnapolymerase II与启动子脱离。从上面的角度来看，已经发现，不仅促进前启动复合物的形成，而且还促进启动子逃逸，对转录激活都很重要。 2 ThiiH在使用TFIIH的核苷酸切除修复系统时，ThiiH在DNA切除修复中的作用，可以在TFIIH的依赖性中观察到修复反应。缺乏TFIIH激酶的突变体似乎比野生型TFIIH具有更强的修复活性。目前，我们正在使用该系统来研究TFIIH的激酶活性和修复之间的关系，并且可以预见，TFIIH的激酶活性在NER中表现出色。