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発がん化防御に関わるXPBおよびXPD遺伝子における変異の分子病態

XPB和XPD基因突变参与致癌保护的分子发病机制

基本信息

批准号：
12213121
负责人：
久武幸司
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213121/
关键词：
転写因子バキュウロウイル DNA修復転写 TFIIH プロモーター

项目摘要

1 GAL4-VP16による転写活性化でのERCC3ヘリカーゼ活性の役割組換え体TFIIHの再構成系を用いてTFIIHの変異体を作成し、GAL4-VP16による転写活性化ではXPBヘリカーゼ活性が非常に重要な役割をしていることが明かとなった。XPBヘリカーゼは基本転写ではpromoter openingとpromoter escapeの段階で作用しているが、GAL4-VP16による転写活性化ではどこで作用しているこかを検討した。まず、premeltした鋳型を用いて転写活性化反応を行いTFIIHの変異体の影響を検討した。この結果、転写活性化の際にTFIIHが関与するのはpromoter escapeの段階であることが分かった。またこの作用は基本転写で見られるTFIHの役割とは異なり、転写活性化に特異的である。実際、種々の変異プロモーターを用いて、転写をごく初期の段階で止め、promote escapeの段階で転写活性化の効果が見られるかどうかを調べると、転写のごく初期に転写活性化因子が作用していることが分かった。この、作用には転写活性化因子のみならず、転写補助因子PC4も必要である。この転写のごく初期の段階では、RNA polymerase IIはまだ安定に転写を行っていないようであり、abortiveな転写に終わることが多い。実際、ATPのアナログを用いて、転写のごく初期の段階でXPBの活性を止めると、RNApolymerase IIはpromoterから離れてしまう。以上のことより、転写の活性化にはpreinitiation complexの形成を促進するだけではなく、promoter escapeを促進することが重要であることが分かった。2 DNA除去修復におけるTHIIHの役割TFIIHを用いたヌクレオチド除去修復系を用いるとTFIIHの依存性にin vitroで修復反応が認められる。TFIIHのキナーゼを欠いた変異体は、野生型TFIIHに比べて修復活性が強いようである。現在この系を用いてTFIIH特にそのキナーゼ活性と修復の関係を調べており、TFIIHのキナーゼ活性がNERに抑制的に働いていることが想像される。

1 GAL4-VP16 is a very important component of ERCC3, which is activated by the activation of XPB. XPB is the basic model for the promoter opening and promoter escape. GAL4-VP16 is the model for the promoter activation. The influence of TFIIH on the activity of the enzyme is discussed. The result is that TFIIH is related to the stage of promoter escape. The role of the TFIH is not to be confused with that of the active TFIH. In fact, the species is different from each other in the early stage of writing, the stage of promoting escape, the stage of writing activation, the effect of writing activation. This action is necessary to write activation factor and auxiliary factor PC4. RNA polymerase II is the most stable enzyme in the early stages of DNA sequencing. In fact, ATP is used in the early stage of the process, XPB activity is stopped, RNApolymerase II is promoted. The activation of the above is important to promote the formation of the preinitiation complex. 2. DNA removal repair in vitro TFIIH is more active than wild-type TFIIH. Now, this is the case with TFIIH. The relationship between TFIIH activity and repair is modulated. The relationship between TFIIH activity and inhibition is visualized.