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新規コアクチベーターによる転写過程の包括的調節機構の解析

新型共激活因子对转录过程的综合调控机制分析

基本信息

批准号：
18055030
负责人：
久武幸司
金额：
$ 5.57万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18055030/
关键词：
遺伝子発現制御クロマチンコアクチベーター

项目摘要

組換え体NF複合体をバキュロウイルスで作製し、試験管内転写因子で転写活性化能を検討した。NF45/90およびNF45/NF11複合体は、それぞれ転写を上昇させたが、NF45/NF11複合体の活性が高かった。両複合体とも転写活性化因子のない状態(基本転写)および転写活性化因子の存在する状態、どちらの場合も転写活性を上げた。転写活性化の機序を明らかにするために、ビーズに固定化した鋳型で転写を行い、基本転写装置内の各因子の挙動を検討すると、TFIIBとTFIIDのプロモーターへの結合の安定化が認められた。GSTプルダウンアッセイでは、NF90およびNF110がTFIIB、TFIID、TFIIHと結合することが明らかとなったことより、NF複合体は、基本転写因子との相互作用によってその結合を安定化させ、転写活性を上げることが示唆された。また、クロマチン免疫沈降法にてNF複合体の細胞内での挙動を調べた。NF複合体は、c-fos遺伝子を刺激する前には、c-fos遺伝子の上流領域に結合していた。C-fos遺伝子を活性すると、NF複合体はc-fos遺伝子の上流領域のみならず、遺伝子のコード領域にも局在することがわかった。この遺伝子内の局在は、RNAポリメラーゼIIと同じ部位に、同様の経時的変化を示し、RNAポリメラーゼIIとNF複合体が一緒に挙動することが分かった。また、NF複合体を細胞より精製すると、幾つかのタンパク質以外にRNAが結合していた。このRNAには低分子のものと、比較的高分子のものがあった。高分子のものはNF90/110の二本鎖RNA結合領域に変異を導入しても認められたため、二本鎖RNA結合領域以外で結合することが示唆された。

The tissue complex NF complex was used to determine the activity of writing factors in the tube. The NF45/90 complex, the NF45/NF11 complex, and the NF45/NF11 complex are highly active. The activation factor (basic writing), the activation factor (basic writing), the writing activation factor (basic writing). The sequence of the activation mechanism is used to determine the operation of the system, the immobilization of the device, the operation of the various factors in the basic device, and the combination of the TFIIBS