膜融合リポソームによる癌遺伝子治療を目指した細胞質内遺伝子発現系の開発

使用膜融合脂质体开发用于癌症基因治疗的细胞质基因表达系统

• 批准号: 12217080
• 负责人: 真弓 忠範
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217080/
• 关键词: 癌遺伝子治療; 細胞質内遺伝子発現系; T7プロモーター; T7RNAポリメラーゼ; 膜融合リポソーム

癌遺伝子治療を目指した細胞質内遺伝子発現系を確立するにあたり、T7RNAポリメラーゼが有するT7プロモーター配列に対する高い特異性と高い転写効率を利用した。まずT7プロモーターを有し、T7RNAポリメラーゼ存在下においてルシフェラーゼを発現するプラスミドであるpT7-IRES-Lを構築した。本プラスミドとT7RNAポリメラーゼとを同時にin vitroにおいて細胞内に導入した結果、導入するT7RNAポリメラーゼ量に依存した遺伝子発現を示すことが示された。また、従来のような遺伝子発現に核移行を必要とするプラスミドと比較し、T7発現系は細胞質内における遺伝子発現であるために、遺伝子導入後、非常に速やかな遺伝子発現が認められた。さらに、非分裂細胞における遺伝子発現効率を検討した結果、遺伝子発現に核移行を必要とする従来のプラスミドでは細胞増殖を抑制することにより著しい遺伝子発現の低下が認められたのに対し、T7発現系においては遺伝子発現効率に細胞の増殖性は全く影響しないことが明らかとなった。今回の検討でT7発現系による遺伝子発現効率は、細胞質内におけるT7RNAポリメラーゼ量に依存することが明らかとなった。つまり、T7発現系の遺伝子発現を増強させるためには細胞質内のアクティブなT7RNAポリメラーゼ量を高く維持する必要があるものと考えられる。そこで細胞質内にアクティブなT7RNAポリメラーゼを供給するため、T7プロモーター制御下でT7RNAポリメラーゼを産生するpT7-AUTO-2を構築し、このプラスミドを併用することによる遺伝子発現増強を試みた。その結果、pT7-IRES-LとT7RNAポリメラーゼだけを細胞に作用させた群に比べ有意な遺伝子発現増強及び長期化が認められた。現在、本システムを癌遺伝子治療に適応すべく、更なる遺伝子発現を目的に転写効率および翻訳効率の上昇を目指したプラスミドの構築を行っている。

Cancer heritage 伝 son treatment を refers し た cytoplasm heritage 伝 son を 発 now department established す る に あ た り, T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ が have す る T7 has プ ロ モ ー タ ー match column に す seaborne る high high い い specificity と planning working rate を using し た. ま ず T7 has プ ロ モ ー タ ー を し, T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ presence に お い て ル シ フ ェ ラ ー ゼ を 発 now す る プ ラ ス ミ ド で あ る pT7 - IRES -l を build し た. This プ ラ ス ミ ド と T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ と を に at the same time the in vitro に お い て in cells に import し た results, import す る T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ quantity に dependent し た heritage 伝 son 発 を now shown す こ と が shown さ れ た. ま た, 従 の よ う な posthumous son 伝 発 now に nuclear migration を necessary と す る プ ラ ス ミ ド と compare し, T7 has 発 now the cytoplasm に は お け る posthumous son 伝 発 now で あ る た め に, but very に 伝 after import, speed や か な heritage 伝 son 発 が now recognize め ら れ た. さ ら に, splinter cell に お け る posthumous son 伝 発 now working rate を beg し 検 た results, but 伝 発 now に nuclear migration を necessary と す る 従 to の プ ラ ス ミ ド で は を inhibit cell raised colonization す る こ と に よ り the し い posthumous son 伝 発 low の が now recognize め ら れ た の に し seaborne, T7 has 発 now に お い て は heritage 伝 発 now working rate に cells の raised the impact は full く colonization し な Youdaoplaceholder0 とが Ming ら となった. Today back の beg で 検 T7 has 発 now is に よ る heritage 伝 は 発 now working rate, the cytoplasm に お け る T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ quantity に dependent す る こ と が Ming ら か と な っ た. つ ま り, T7 has 発 is の posthumous son 伝 発 を now raised strong さ せ る た め に は cytoplasm の ア ク テ ィ ブ な T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ levels high を く maintain す る necessary が あ る も の と exam え ら れ る. The cytoplasm に そ こ で ア ク テ ィ ブ な T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ を supply す る た め, T7 has プ ロ モ ー タ ー under the system of imperial で T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ を produce す る pT7 - AUTO - 2 を constructing し, こ の プ ラ ス ミ ド を and す る こ と に よ る heritage 伝 発 now son raised strong を try み た. そ の results and pT7 IRES -l と T7RNA ポ リ メ ラ ー ゼ だ け を cells に さ せ に た group than べ intentionally な heritage 伝 発 now raised strong and び permanent が recognize め ら れ た. Now, this シ ス テ ム を carcinoma heritage 伝 son treatment に optimum 応 す べ く, more な る heritage 伝 son 発 を purpose に now planning to write working rate お よ び turn 訳 sharper rate rising の を refers し た プ ラ ス ミ ド の line build を っ て い る.

项目成果

Imazu,S.: "A novel nonviral vector based on vesicular stomatitis virus."J.Control Release.. 68. 187-194 (2000)

Imazu,S.：“一种基于水泡性口炎病毒的新型非病毒载体。”J.Control Release.. 68. 187-194 (2000)

Nakanishi,T.: "Fusogenic liposomes efficiently deliver exogenous antigen through the cytoplasm into the MHC class I processing pathway."Eur.J.Immunol.. 30. 1740-1747 (2000)

Nakanishi,T.：“融合脂质体有效地将外源抗原通过细胞质传递到 MHC I 类加工途径。”Eur.J.Immunol.. 30. 1740-1747 (2000)

Kondo,M.: "Growth inhibition of human leukemia HL-60 cells by an antisense phosphodiester oligonucleotide encapsulated into fusogenic liposomes."Biol.Pharm.Bull.. 23. 1011-1013 (1999)

Kondo,M.：“封装在融合脂质体中的反义磷酸二酯寡核苷酸对人白血病 HL-60 细胞的生长抑制。”Biol.Pharm.Bull.. 23. 1011-1013 (1999)