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牛乳蛋白貭によるアポトーシス誘導とその感染予防・治療における役割

乳蛋白诱导细胞凋亡及其在感染防治中的作用

基本信息

批准号：
12876031
负责人：
金丸義敬
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

乳蛋白質による細胞のアポトーシス誘導は、頻繁に起こることが予想される感染などによる細胞の形質転換によって生体に不都合となった消化管細胞を速やかに排除するという生理的意義を有すると考えるのは合理的である。本研究は、α-LAのアポトーシス誘導活性発現に関与する分子構造と作用特性を明確に示すとともに、その生理的意義を動物実験によって検討することを目的とし、以下のような研究成果を得た。(1)活性特性と構造相関:市販のα-LA標品を用いてIEC-6細胞の増殖への影響をWST-1法及びチミジン取り込み法で調べたところ、顕著な細胞増殖の阻害が濃度依存的に観察された。しかし、活性を示す濃度レベルは標品のロットに依存して変動し、0.5mg/mL以上で阻害が認められる場合もあれば、5mg/mLを必要とするもの、もしくは、全く不活性のロットもあり、特定の活性分子種の存在が示唆された。IEC-6にα-LAを30分程度曝すことにより細胞死が誘導され、市販キットによる検討から、この細胞死がアポトーシスによるものであることが確認された。このα-LAのアポトーシス誘導作用は50℃、30分間の加熱処理で顕著に低下し、還元アルキル化によって完全に消失した。Superdex75のゲルろ過を行い、市販のα-LA標品から活性分子種の分離を試みたところ、高分子量化したα-LAを含むフラクションには活性が認められず、単量体フラクションに活性が認められたことから、活性分子種はコンフォメーション変化を起こした単量体のフォールディング変異体であることが予測された。この変異体の分離をさまざまに試みているが、現在のところ適当な分離手法を確立するまでにはいたっていない。(2)動物への投与の影響評価:ヒトロタウィルス感染の動物実験系を用いて、感染後のα-LA投与の影響を観察したが、下痢からの回復時間の短縮を認めるにはいたらなかった。これは、用いたα-LAのロットがアポトーシス誘導活性の低いものであったことが主な理由の一つと思われる。現在、活性分子種の精製を通して、動物投与の影響をさらに検討中である。

Milk protein is the most common form of protein in the digestive tract. This study is aimed at clarifying the molecular structure of α-LA and its physiological significance. (1)Activity characteristics and structure correlation: the effect of commercial α-LA standard on IEC-6 cell proliferation was investigated by WST-1 method and TMS method, and the concentration-dependent inhibition of cell proliferation was observed. The activity level is dependent on the activity level of the standard substance. When 0.5 mg/mL or more is considered harmful, 5mg/mL or more is necessary. The activity level is completely inactive. The presence of specific active species is indicated. IEC-6 α-LA 30-minute exposure to cell death induction, marketing, and identification of cell death The induction of α-LA was completely eliminated after heating at 50℃ for 30 minutes. Superdex75 is a commercially available alpha-LA standard for the isolation of active molecular species. It is a high molecular weight substance. It is a high molecular weight substance. The separation of the two species is now established. (2)Evaluation of the effect of α-LA on the infection of animals: the effect of α-LA on the infection of animals, the shortening of the recovery time of diarrhea, and the shortening of the recovery time. The activity of α-LA is low and the reason for α-LA is low. Now, the purification of active molecular species and the influence of animal investment are discussed.