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FRETを用いる低分子脂溶性活性物質レセプターの動態イメージング

利用 FRET 对小分子脂溶性活性物质受体进行动态成像

基本信息

批准号：
12877005
负责人：
河田光博
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877005/
关键词：
グルココルチコイドレセプターミネラルコルチコイドレセプターエストロゲンレセプター FRET 熱ショックタンパク Brg RNA pol II ヘテロダイメライゼーション CFP YFP 培養細胞リアルタイムイメージング共役因子核内動態 FRET値

项目摘要

グルココルチコイドレセプター(GR)はデキサメサゾン、コルチコステロン、アルドステロンに対しては細胞質・核移行を生じたが、エストロゲンには反応しなかった。ミネラルコルチコイドレセプター(MR)はデキサメサゾン、コルチコステロン、アルドステロンの他に、プロゲステロンに対しても細胞質・核移行を行った。これはプロゲステロンが化学構造的にアルドステロンと近似しているからと考えられた。細胞質・核移行にどのような分子シャペロンが関るのか検索した。geldanamycinは熱ショックタンパクHSP90と結合することによって、シャペロン機能を阻害する薬物である。Cos細胞において、GRとMRはいずれもgeldanamycin投与によってリガンド投与による細胞質・核移行が阻止されたことから、HSP90がその輸送に強く関っていることが明かとなった。共焦点レーザー顕微鏡によってGRとMRは核内での分布がほぼ同じ領域に認められたため、FRET解析を行った。リガンド添加による時間経過とともにFRETの頻度が増したことから、核内でのリガンド添加によるヘテロダイメライゼーションの形成が強く示唆された。性ホルモン受容体であるエストロゲンレセプターERも同様の方法で細胞内動態を解析した。また、ER(α、β)やPRなどはリガンドがない状態でもすでに核に分布しており、リガンドが作用すると核内のリセプター分布様相が変化し、ほぼ均一に分布していたレセプターが細かい粒状の斑点状になった。ER(α、β)の斑点はRNApolymeraseIIの部位とは一致せず、クロマチンのリモデリングに関る分子であるBrgと一致していた。また、ERαとβはリガンド添加(エストラジオール)によって核内でほぼ同じ部位に存在し、両者によるFRET形成が観察されたことから、これらもヘテロダイメライゼーション化していることが示唆された。

In addition to the above, it is also necessary to make sure that all the information and materials are properly handled. In addition to the above, it is also necessary to conduct research on the nuclear migration of human cells. This is due to the fact that the chemical structure of progestin is similar to that of progestin. Cytoplasmic and nuclear migration is a key factor in molecular migration. Geldanamycin is a compound that inhibits the function of HSP90. Cos cells, GR, MR, etc., have a strong relationship with the cytosol and nuclear migration, HSP90, etc. Common Focus Microscope GR and MR Distribution in Nucleus The frequency of FRET increases with the increase of time, and the frequency of FRET increases with the increase of time. A method for analyzing intracellular dynamics in a cellular receptor ER(α, β) and PR (α, β) are distributed uniformly in the nucleus and are distributed uniformly in the nucleus. ER(α, β) spots on RNApolymerase II sites are consistent with each other. In addition, the ERα and β are added to the nucleus, and the FRET formation is observed.