ステロイドホルモンおよび受容体の神経細胞死に対する作用機構の解明

阐明类固醇激素和受体对神经元细胞死亡的作用机制

• 批准号: 06272228
• 负责人: 河田 光博
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06272228/
• 关键词: ステロイドホルモン; ステロイドホルモンレセプター; 細胞死; 遺伝子発現調節; 性差; 脳分化機構

胎仔・新生仔ラットの脳室内および脳実質内に、合成のグルココルチコイドであるデキサメサゾンを投与すると海馬の歯状回の顆粒細胞が特異的に細胞死をきたした。これらの変化は投与したデキサメサゾンの量、投与日数に比例していた。この領域はグルココルチコイドレセプターの分布が豊富なところであるため、グルココルチコイドレセプターの抗体作製に着手した。グルココルチコイドレセプター抗体の作製を行った。グルココルチコイドレセプターの転写調節ドメインをコードするcDNAが挿入されたイクスプレションベクターを用い、GST癒合タンパクを作製したのち、分離、精製し、ウサギを免疫し、活性の高い抗体を得た。特異性の検定にはイムノブロッティング法や免疫組織化学法を用いた。また、in vitro トランスクリプション法によってジゴキシゲン標識cRNAプローブをin situハイブリダイゼーションン検索のために作製した。また、in vitroトランスクリプション法によってジゴキシゲン標識cRNAプローブをin situハイブリダイゼーション検索のために作製した。現在、これらを用いてグルココルチコイドレセプターのアンチセンスDNAを組み込ませたレトロウィルスベクターを作製、C6グリオーマ細胞に感染させ、増殖が抑制されるかどうかの検討を行っており、ステロイドホルモンレセプターの増殖過程における検索が今後の研究課題として残った。エストロゲンレセプターの発現については、生直後のラット視床下部領域を中心にin situハイブリダイゼーション法を行っており、またエストロゲンレセプターの抗体による免疫組織化学法も併せて検討した。エストロゲンレセプターの発現は内側視束前核で雌雄差が顕著に認められ、この領域へのアンチセンスDNA投与によって性分化が修飾されることから、エストロゲンレセプターの脳分化過程における重要性が明確となった。

Tire tsai, newborn larvae ラ ッ ト の 脳 indoor お よ び 脳 に within be qualitative, synthetic の グ ル コ コ ル チ コ イ ド で あ る デ キ サ メ サ ゾ ン を cast with す る と hippocampal の 歯 gyrus が specific に の granule cells die を き た し た. The ratio of the <s:1> variable <s:1> investment to the amount of <s:1> たデキサメサゾ <e:1> <e:1> <s:1> and the investment to the number of days に <s:1> て た た た た. こ の field は グ ル コ コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー の distribution が aboundant な と こ ろ で あ る た め, グ ル コ コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー に の antibody as a system to し た. Youdaoplaceholder0 グ ココ ココ チコ チコ ドレセプタ ドレセプタ った antibody production を line った. グ ル コ コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー の planning write adjust ド メ イ ン を コ ー ド す る cDNA が scions into さ れ た イ ク ス プ レ シ ョ ン ベ ク タ ー を い, GST healing タ ン パ ク を cropping し た の ち, separation, refining し, ウ サ ギ を immune し, high active の た を い antibody. Specific <s:1> 検 determination に に ムノブロッティ ムノブロッティ ムノブロッティ グ method や immunohistochemical method を use 検 た. ま た, the in vitro ト ラ ン ス ク リ プ シ ョ ン method に よ っ て ジ ゴ キ シ ゲ ン logo cRNA プ ロ ー ブ を in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン ン 検 cable の た め に cropping し た. ま た, the in vitro ト ラ ン ス ク リ プ シ ョ ン method に よ っ て ジ ゴ キ シ ゲ ン logo cRNA プ ロ ー ブ を in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 検 cable の た め に cropping し た. Now, こ れ ら を with い て グ ル コ コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー の ア ン チ セ ン ス DNA を group み 込 ま せ た レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を system, C6 グ リ オ ー マ cells に infection さ せ, raised colonization が inhibit さ れ る か ど う か の 検 line for を っ て お り, ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン レ セ プ タ ー の raised colonization process に お け る 検 が today The subsequent research topics are と, て, and った. エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー の 発 now に つ い て は, straight after の ラ ッ ト を center に depending on the lower part of the bed field in situ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン line method を っ て お り, ま た エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー の antibody に よ る immune histochemical method and も せ て beg し 検 た. エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー の 発 は now in side beam former nuclear で male and female difference が 顕 the に recognize め ら れ, こ の field へ の ア ン チ セ ン ス DNA cast and に よ っ て sexual differentiation が modified さ れ る こ と か ら, エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー の 脳 differentiation に お け る importance が clear と な っ た.

项目成果

Nishi,M.,Ueda,S.,Morita,N.and Kawata,M.: "Effects of glucocorticoid on neurones of rat dentate gyrus in dissociated culture." NeuroReport. 5. 2446-2448 (1994)

Nishi,M.、Ueda,S.、Morita,N. 和 Kawata,M.：“糖皮质激素对离解培养物中大鼠齿状回神经元的影响”。

Yuri,K.,Kawata,M.: "Region-specific changes of tyrosine hydroxylase-immunoreactivity by estrogen treatment in female rat hypothalamus." Brain Res.645. 278-284 (1994)

Yuri,K.,Kawata,M.：“雌激素治疗雌性大鼠下丘脑酪氨酸羟化酶免疫反应性的区域特异性变化。”

Morimoto,M.,Morita,N.,Kawata,M.: "The effects of NGF and glucocorticoid on the cytological features of rat chromaffin cells in vitro." NeuroReport. 5. 945-956 (1994)

Morimoto,M.、Morita,N.、Kawata,M.：“NGF 和糖皮质激素对体外大鼠嗜铬细胞细胞学特征的影响”。