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大脳皮質の性分化に対する性ステロイドホルモンと受容体の役割

性类固醇激素和受体对大脑皮层性别分化的作用

基本信息

批准号：
07252224
负责人：
河田光博
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題では、視覚領をはじめとする大脳皮質において性ホルモンとレセプターの細胞死・生存による脳組織構築への役割を明らかにするため、レセプター蛋白の各ドメイン別のプローブと抗体を作成し、脳の発達過程において、さまざまなレセプター蛋白のアイソフォームの発現を追求した。また脳組織を培養し、培養環境を変化させてレセプター蛋白の発現や細胞死などの様相を検索することにより、生物個体が持つ内因性プログラムに対する外因子の影響の検討を行った。エストロゲン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイドレセプターのcDNAを制限酵素によってホルモン結合ドメイン、DNA結合ドメイン、全長の異なる組み合わせのDNAフラグメントに分け、グルタチオンSトランスフェラーゼとの融合蛋白を発現するpGEX-3Xプラスミッド内に、平滑末端結合により挿入した組換えベクターを用意した。できたプラスミッドを大腸菌にトランスフォームさせ、増殖させたのち融合蛋白を可溶化し、精製した。ファクターXによって目的とする蛋白を単離、精製ののちアジュバントを作り、ウサギを免疫した。抗体の力価検定にはウエスターンブロットやELISAで行い、アフィニティカラムで抗体の精製を行った。その結果、特異性と感受性のきわめて高い抗体が得られた。脳組織をこれらの抗体を用いる免疫組織化学法により染色すると、脳のさまざまな領域に陽性細胞が分布していた。免疫電子顕微鏡を用いると免疫陽性反応は核に限局していた。エストロゲンの突起伸長作用を直接確かめるために、視束前野神経細胞を分散培養し、培養液中にエストロゲンを投与する実験を行った。エストロゲンを投与された培養神経細胞は細胞骨格蛋白の免疫陽性の突起を顕著に伸ばし、エストロゲン受容体を有していることが明らかとなった。同時にバリコシティーの数も増加していた。突起の性状については、軸索、樹状突起の明確な区別は困難であった。このことは、はっきりした細胞突起極性を有する皮質ニューロンと大きく異なる点であった。

This research topic is to explore the development of antibodies against different types of proteins in the cortex and its development process. To investigate the effects of exogenous factors on the development of cell death in tissue culture and culture environment. pGEX-3X- The fusion protein was solubilized and purified. The purpose of the protein is to isolate, refine and protect the protein. Antibody determination, ELISA, antibody purification Results, specificity, sensitivity, and antibody-specific antibodies were obtained. Immunohistochemical staining of the tissue with antibodies was used to detect the distribution of positive cells in the tissue. Immunoelectron microscopy is used to detect the presence of positive antibodies. The growth of the neurons was directly confirmed by the dispersion culture of neurons in the culture medium. In addition, the immune response of cultured neurons to osteocin was also investigated. At the same time, the number of people in the city increased. Protrusions, axons, dendrites, and distinct traits are difficult to distinguish. The difference in polarity between the two is that