機能的ペプチドを用いた変異p53蛋白の活性化―殺細胞効果と癌治療への応用の検討―

使用功能性肽激活突变p53蛋白 - 细胞杀伤效果的检查及其在癌症治疗中的应用 -

• 批准号: 12877252
• 负责人: 冨田 善彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877252/
• 关键词: p53; 機能的ペプチド; 泌尿器科癌

前年度の検討に引き続き機能的ペプチドを用いた変異p53蛋白の活性化、殺細胞効果と癌治療への応用の検討を行った。1)ペプチドの作成p53C末端(アミノ酸361-382)のアミノ酸配列をもつペプチドを作成、また、コントロールペプチドは、22アミノ酸に含まれるヒスチジン(His)、リジン(Lys)、アルギニン(Arg)をアラニン(Ala)に変異させたペプチドを作成した。細胞膜貫通システムは、アンテナペディアを使用した。2)DNA binding assay精製p53蛋白(GST-p53)は、p53のコドン175がアルギニン(Arg)からヒスチジン(His)に変異している構造的変異R175H、また、コドン273がアルギニン(Arg)からヒスチジン(His)に変異している機能的変異A273Hを用いた。コントロールとしてWild-typep53を用いた。p53C末端ペプチドでは、p53-A273Hは、Wild-type p53とほぼ同様のDNA結合能を認めたが、p53-R175Hは、p53-R273Hと比し、特異的な結合が弱く見られた。以上より、精製p53蚤白上では、機能上、構造上の変異であってもP53C末端ペプチドがDNA結合能を回復することがわかった。3)細胞レベルでの効果細胞株CW678(R175H),SW480(R273H),BL60(R282W),HL60(p53-)におけるp53C末端ペプチドの効果を検討したところ,SW480の増殖が30%以上抑えられた。CW678も増殖は抑制されたが、15%以下であった。HL60では、ペプチドの影響は受けなかった。AnnexinV stainingでの検討ではアポトーシスの誘導が確認された。以上p53C末端ペプチドのがん細胞の殺細胞効果は確認されたが,正常細胞への影響が今後の検討課題である.

In the previous year, we introduced the use of p53 protein in the treatment of cancer in the first year. 1) the end of p53C (Arg) was made into p53C (acid 361-382), and the configuration of acid (Ala) was made. The membrane passes through the cell membrane, and the cell membrane is used. 2) DNA binding assay p53 protein (GST-p53), p53 protein 175 (Arg), p53 protein (His), p53 protein (Arg), p53 protein, p53 protein, Please tell me how to use the Wild-typep53. The combination of p53 C terminal antigens, p53-A273H, Wild-type p53 antigens and DNA antigens, p53-R175H antigens, p53-R273H antigens, and special antigens can be used in combination with weak antigens. The combination of the above equipment, p53 flea white load, machine can be used, and the end of the p53 C terminal device can be used in combination with the combination of p53 and Flex can be used to recover the performance of the device. 3) the cell lines CW678 (R175H), SW480 (R273H), BL60 (R282W), HL60 (p53 -)