新規分子シャペロンORP150の泌尿器癌治療への応用

新型分子伴侣ORP150在泌尿系肿瘤治疗中的应用

• 批准号: 12877254
• 负责人: 並木 幹夫
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877254/
• 关键词: 分子シャペロン; VEGF; ORP150; 前立腺癌; 泌尿器癌; 腎癌

新規分子シャペロンORP15は,低酸素下で誘導され細胞死を抑制するが,最近癌組織にも存在することが分かってきた.癌が増殖するためには,癌組織を栄養する新生血管の存在が必須であり,VEGFをはじめとする増殖因子の関与が考えられている.本研究では,ORP150が分泌蛋白であるVEGFの輸送および成熟過程において重要な役割を果たしていることを証明し,アンチセンス法を用いた癌遺伝子治療の有用性につき検討を行った.まずORP150のantisense cDNAを導入したアデノウィルスベクターを作製し,in vitroにおいてヒト前立腺癌細胞株DU145を用いた基礎的検討を行った.作製したアデノウィルスは,一定の条件下(20MOI, 24h)で非特異的細胞障害を認めることなく100%の感染効率を示した.ウェスタンプロット法にてantisense ORP150が,ORP150の蛋白発現を抑制することを証明した.ORP150の抑制により,VEGFがmRNAレベル,および培養上清を用いたELISA法にて蛋白レベルでも抑制されることを確認した.あらかじめアデノウィルスを感染させたDU145が,VEGF抑制を介して血管新生が抑制されることを受精鶏卵漿尿膜法を用いて証明し,さらに同様の細胞をヌードマウス皮下に移植することで腫瘍形成が著しく抑制されることを証明した.以上の検討から,antisense ORP150cDNAを導入したアデノウィルスは,前立腺癌細胞株DU145に対して,VEGF抑制を介する抗腫瘍効果を持つことが示唆された.そこで治療実験として,皮下移植されたDU145腫瘍に対してアデノウィルスを局所投与した.コントロール群に比べ有意に腫瘍増殖が抑制され,antisense ORP150を利用した遺伝子治療の有用性が認められた.

The new molecule SCHAPRON ORP15 can inhibit cell death induced by hypoxia, which has recently been found in cancer tissues. The relationship between VEGF and tumor growth factors This study demonstrates the importance of ORP150 in VEGF delivery and maturation, and the usefulness of ORP150 in the treatment of cancer. ORP150 cDNA was introduced into the cell line DU 145, and the cell line DU145 was cultured in vitro. Under certain conditions (20MOI, 24h), non-specific cell damage was recognized and 100% infection rate was demonstrated. The inhibition of ORP150 protein expression was demonstrated by antisense ORP150 assay. The inhibition of ORP150 protein expression was confirmed by ELISA assay. The inhibition of VEGF was demonstrated by the method of fertilization and oocyte plasma urine membrane, and the inhibition of tumor formation was demonstrated by subcutaneous transplantation of the same cells. The antisense ORP150cDNA was introduced into the tumor cell line DU145 and the VEGF inhibition was mediated. The treatment was carried out by subcutaneous transplantation of DU145 tumor. The utility of antisense ORP150 in the treatment of cancer is recognized.

项目成果

Kato H, Namiki M, et al.: "Potential benefits of combining cytosine deaminase /5-fluorocytosine(CD/5FL)gene therapy and irradiation for prostate cancer"Int J Urol. (in press). (2002)

Kato H、Namiki M 等人：“结合胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶 (CD/5FL) 基因治疗和放射治疗前列腺癌的潜在益处”Int J Urol。

Y.Kitagawa, et al.: "Demethylating reagent 5-azacytidine inhibits telomerase activity in human prostate cancer cells through transcriptional repression of hTERT"Clinical Cancer Research. 6. 2868-2875 (2000)

Y.Kitakawa 等人：“去甲基化试剂 5-氮杂胞苷通过 hTERT 的转录抑制来抑制人前列腺癌细胞中的端粒酶活性”临床癌症研究。