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遺伝子導入法の歯周疾患治療への応用に関する基礎的研究

基因转移方法应用于牙周病治疗的基础研究

基本信息

批准号：
12877341
负责人：
春日井昇平
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、遺伝子導入法による、確実で簡便な、そして安全な歯周組織の再生法を検討することである。今日の遺伝子導入の多くはvirus vectorによるものであるが、virus vectorは導入効率が良い反面、免疫反応の惹起やタンパク発現に対する制御の問題などの危険性を備えている。そこで我々は、古典的で簡便なリン酸カルシウム法とコラーゲンを用いて、安全性の高いplasmid vectorをin vivoにおいて、細胞に直接導入する方法を検討した。Plasmid vectorとしては蛍光タンパクをコードするpEGFPを用い、通法によってリン酸カルシウムとの混合溶液を作製した。次に、アテロコラーゲンゲルをキャリアーとして選択し、plasmid vectorを含むリン酸カルシウム溶液とさらに混合させた後、凍結乾燥にて円柱状の「ペレット」を作製した。このペレットはplasmid vectorを充分に保持することが示された。10週齢雄Wister ratの頭頂骨骨膜下に同様のペレットを埋入し、一定期間飼育後、頭頂骨周囲における蛍光タンパクの発現を、レーザー顕微鏡にて観察した。その結果、ペレットを舞人した部位に限局して、蛍光タンパクの発現が観察された。Plasmid vectorにBMP2を挿入し、同様のペレットを作製しラットの皮下に埋入し組織学的に検討をおこなったところ、埋入した部位に骨様組織の形成が観察された。In vivoの遺伝子導入法において、リン酸カルシウム法を応用した実験例は報告されていない。リン酸カルシウムとコラーゲンを組み合わせた遺伝子導入この方法は、確実で簡便な、そして安全な安価な遺伝子導入法である。今後は、この遺伝子導入法の組織再生への応用についてさらに検討を進めていく予定である。

The purpose of this study is to investigate the method of DNA introduction, which is simple, accurate and safe for tissue regeneration. Today, many virus vectors are introduced into the virus vector, and the virus vector is introduced into the virus vector. The efficiency of the virus vector is good. The immune response is caused by the virus vector. The problem of controlling the virus vector is dangerous. The classical, simple, and safe method of plasmid vector in vivo and direct cell introduction is discussed. Plasmid vector and pEGFP can be used in the preparation of mixed solutions. The second step is to freeze and dry the solution containing the acid. The plasma vector is fully maintained. 10 weeks old Wister rat's parietal bone subperiosteum was buried, and after a certain period of incubation, the parietal bone periosteum was observed by microscope. The results of the survey were as follows: Plasmid vector BMP2 insertion, same type of tissue control, subcutaneous tissue embedding, histological examination, bone tissue formation at the site of implantation In vivo gene transfer method, the method of gene transfer is used in the case of gene transfer. The method of introducing the gene into the cell is simple, reliable and safe. In the future, the introduction of genetic material into tissue regeneration will be discussed in detail.