レゾルフィン類/フラビン酵素系を用いる新規生体分析法の開発
使用试卤灵/黄素酶系统开发新的生物分析方法
基本信息
- 批准号:12877353
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2001
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
前年度の知見に基づき、レゾルフィン(1)を生成する還元およびパーハイドロリシス反応について、グルコースおよび過酸化水素(H2_O_2)分析における指示反応としての可能性を検討し、以下の知見を得た。1)アセチルレゾルフィン(3)がH_2O_2との反応(パーハイドロリシス)により1に変換されること、ならびに、本パーハイドロリシスを蛍光指爪反応として用いることによりグルコースオキシダーゼのみを用いてグルコース分析できることを明らかにした。また、本指示反応は、除タンパク操作は必要とはするものの、アスコルビン酸、ビリルビン等の還元性物質の影響を受けることなく血糖値測定に利用できることも見い出した。2)レサズリン(2)から1への還元を指示反応とするグルコースの酵素分析系すなわちグルコースデヒドロゲナーゼ/NAD+/ジアホラーゼ/2系について最適化を行い、本手法が除タンパク処理を必要としない、且つ、アスコルビン酸の影響を受けない血糖値測定法となることを明らかにした。3)3のパーハイドロリシスはグルコース分析における有効な蛍光指示反応として利用できるが、多様な試料中のH_2O_2分析に適用するには、ブランク溶液における単純加水分解による蛍光応答を極力小さくする必要がある。そこで、様々なアシルレゾルフィンを合成するとともに、様々な条件下におけるそれらのパーハイドロリシスに対する感受性ならびに単純加水分解に対する抵抗性を評価した。その結果、アシルレゾルフィン、緩衝液ならびに反応温度として、それぞれピバロイルレゾルフィン、リン酸緩衝液(pH8.0、20mM)ならびに25℃を用いた場合、H_2O_2をより高感度に且つ広い定量濃度範囲で蛍光分析できることを明らかにした。また、リン酸緩衝液(pH7.5、20mM)を用いる、すなわち、より中性に近い条件下における高感度H_2O_2分析はイソブチリルレゾルフィンを用いることにより行えることも見い出した。4)レゾルフィンとは異なる蛍光特性を示すフルオレセイン類や7一ハイドロキシクマリン類のアシル化体が、アシルレゾルフィン類と同様にパーハイドロリシスを受けること、ならびにH_2O_2分析のおける蛍光色原体として利用できることを明らかにした。その結果、分析サンプルに応じて異なる励起および検出波長が利用可能なH_2O_2分析法を確立することができた。
In the past year, the basic knowledge of the reaction mechanism, and the peracidified water element (H2_O_2) analysis were discussed, and the following knowledge was obtained. 1) H_2O_2 and H_2O_2 are the most important factors in the analysis of H_2O_2 and H_2O_2. Moreover, this instruction shows that although the operation of removing the filter is not necessary, it can be used in the measurement of blood glucose levels without being affected by reducing substances such as ascorbate and pyridoxine. 2) The enzyme analysis system of the enzyme analysis system of the enzyme analysis 3)3. The use of light indicator in the analysis of H_2O_2 in a variety of samples is necessary for the analysis of pure water. For example, if you want to make a reservation, you can make a reservation. The results were as follows: pH 8.0, pH 20, pH 25, pH 25, pH 25 H_2O_2 analysis was performed in neutral and neutral acid buffer (pH 7.5, 20mM). 4) The light source of H_2O_2 analysis is different from the light source of H_2O_2. The results of the analysis are different from those of the excitation and detection wavelengths, which can be established by using the H_2O_2 analysis method.
项目成果
期刊论文数量(8)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
前田初男: "Hydrogen Peroxide-Induced Deacetylation of Acetyl Resorufin as a Novel Indicator Reaction for fluorometric Detection of Glucose Using only Glucose Oxidase"Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 49(in press). (2001)
Hatsuo Maeda:“过氧化氢诱导的乙酰试卤灵脱乙酰化作为仅使用葡萄糖氧化酶进行葡萄糖荧光检测的新型指示剂反应”《化学和制药通报》49(出版中)。
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
前田初男: "Resazurin as an electron acceptor in glucose oxidase-catalyzed oxidation of glucose"Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 49. 622-625 (2001)
Hatsuo Maeda:“刃天青作为葡萄糖氧化酶催化的葡萄糖氧化中的电子受体”《化学与药物通报》49. 622-625 (2001)。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
松浦伸哉: "Blood glucose determination with the reduction of resazurin as a fluorometric indicator reaction"Bunseki Kagaku. 51. 111-115 (2002)
Shinya Matsuura:“用刃天青还原作为荧光指示剂反应测定血糖”Bunseki Kagaku。 51. 111-115 (2002)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
前田初男: "Hydrogen peroxide-induced deacetylation of acetyl resorufin as a novel indicator reaction for fluorometric detection of glucose using only glucose oxidase"Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 49. 294-298 (2001)
Hatsuo Maeda:“过氧化氢诱导的乙酰试卤灵脱乙酰化作为仅使用葡萄糖氧化酶荧光检测葡萄糖的新反应”《化学和制药公报》49. 294-298 (2001)。
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- 作者:
- 通讯作者:
前田初男: "Resorufin as an Electron Acceptor in Glucose Oxidase-Catalyzed Oxidation of Glucose"Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 48. 897-902 (2000)
Hatsuo Maeda:“试卤灵在葡萄糖氧化酶催化的葡萄糖氧化中作为电子受体”《化学与制药通报》48. 897-902 (2000)。
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