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活性クロマチン・不活性クロマチンの境界の分子機構の解析

活性与非活性染色质边界的分子机制分析

基本信息

批准号：
12878140
负责人：
嶋田拓
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878140/
关键词：
クロマチンの境界インスレーター CTCF

项目摘要

多細胞生物の分化した細胞では,ほとんどの遺伝子は不活性クロマチンとして存在する。不活性クロマチンと活性クロマチンの間には境界が存在し、境界を形成する複合体が不活性クロマチンからのDNAメチル化等の不活性化の波を遮断すると予想されてきた。しかし,生物学的に重要な意味をもつにも関わらず,その分子機構については,ほとんど明らかにされていなかった。この研究では,クロマチンの境界を形成するために必須の塩基配列を特定化し,クロマチンの境界複合体を形成するタンパク質因子の同定と、因子の遺伝子のクローニングを行った。また、トランスジェニック生物作出の際に大きな障壁となっているポジション効果を,回避するためにクロマチンの境界が有効であることを示した。1.ウニのアリールスルファターゼ(Ars)遺伝子上流(-2686〜-2113)に存在するクロマチンの境界約600塩基対を細分化し、エンハンサー遮断効果を指標に境界(インスレーター)活性を解析した。その結果、-2232〜-2175の配列がインスレーター活性に不可欠であることが明らかになった。2.また、この領域に結合する因子を、酵母を用いたOne Hybridシステムによってクローニングしたところ、CTCFホモログ及び、新規遺伝子がクローニングされた。新規遺伝子はインスレーター内のGストレッチに結合することが示されたので、Gストレッチ結合因子(GSBP)と名付けた。3.GSBPは分裂間期の核に存在し、染色体分裂期に消失することが明らかになった。4.さらに、GSBPのDNA結合ドメインのみを強制的に発現させると染色体分離に異常が生じることが明らかになった。5.ヒト、ショウジョウバエからGSBPホモログを単離した。6.ウニのArsインスレーターが、ヒト培養細胞、マウス胚、植物培養細胞でもポジション効果を遮断する活性があることを確認し、インスレーターが将来的に遺伝子導入技術の飛躍的進歩に貢献する可能性を示唆することができた。

The differentiated cells of multicellular organisms are not active, and the genes of exist. Inactivation of DNA and other inactivation waves is expected to occur in the presence of inactive DNA and the formation of complex DNA. The importance of biology means that the molecular mechanism of biology is important, and the molecular mechanism is important. This research is aimed at the formation of boundary conditions, the necessary base alignment, the formation of boundary complexes, the identification of quality factors, and the genetic transformation of factors. When a person makes a move, he or she will be able to avoid the barrier. 1. The analysis of the activity of the upper stream (-2686 ~-2113) of the gene in the presence of the gene is based on the subdivision of the gene in the range of the gene in the index. As a result,-2232 ~-2175 are arranged in the same way as in the same way. 2. The combination of factors in the field, yeast, etc. One Hybrid System, CTCF, etc. The new GSBPs are called GSBPs. 3. GSBP has the existence of nuclei in interphase and the disappearance of chromosomes in interphase. 4. DNA binding and stress of GSBP occur during chromosome segregation. 5. 6. It is possible to confirm the activity of cell culture, embryo culture and plant culture and to contribute to the progress of gene introduction technology in the future.