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原腸形成の遺伝子機構

原肠胚形成的遗传机制

基本信息

批准号：
05277208
负责人：
嶋田拓
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウニ胚におけるアリールスルファターゼ(Ars)遺伝子の発現調節に関して、本年度は以下の成果が得られた。(1)Gストリング結合蛋白質の単離:Ars遺伝子上流のエンハンサー領域には多数のGストリング配列があり、この配列への特異的結合能を指標にGストリング結合蛋白質の単離を行った。原腸胚核抽出液から、Gストリングを含むArs遺伝子断片を結合させたアフィニティカラム、DEAEセルロースカラム、硫安塩析、SDS-PAGE(12%)で活性画分を単1バンドとして単離した。(2)ドーサル配列結合活性の単離:ドーサルモチーフへの結合活性を目安に、ウニ胚核抽出液をアフィニティカラム、DEAEセルロースカラム、SDS-PAGEで分画し、68kD蛋白質を得たが、ドーサル結合蛋白質と同定するには至っていない。(3)Ars遺伝子インビトロ転写系:DNA結合蛋白質の転写因子活性を検索するためインビトロでArs遺伝子を転写する核抽出液系を作成した。この系ではArs遺伝子の転写は見られるが、上流のエンハンサーをインビトロで働かせることは今年度は成功しなかった。(4)Ars遺伝子の組織特異的発現調節領域の検索:Ars遺伝子の全転写調節領域にCATを結合させた融合遺伝子をウニ卵に顕微注入して発生させ、CAT抗体を用いた全載標品免疫蛍光染色法でCAT発現部位を検索すると、CATの発現は反口外胚葉でのみ認められた。この融合遺伝子のArs領域からポリピリミジン配列とその近傍配列を欠失させたものを注入すると、発現の反口外胚葉特異性が失われたので、ポリピリミジン配列またはその近傍にArs遺伝子の組織特異的発現を制御するシスエレメントがあると考えられる。

The following results were achieved during the year: (1)G The binding energy index of most of the binding proteins is the binding energy index of the binding proteins. The nucleic acid extract of gastrula was extracted from the embryo, and the DNA fragment containing Ars gene was combined with DNA fragment, DEAE DNA fragment, sulfur analysis, SDS-PAGE(12%) and activity analysis. (2)The sequence of binding activity was as follows: binding activity of DSCN, DSCN, DEAE, SDS-PAGE, 68kD protein identification, DSCN binding protein identification, etc. (3)Ars gene expression system:DNA binding protein expression factor activity detection system was prepared. This is the first time that I've seen this. (4) Detection of tissue-specific expression regulatory domain of Ars gene: Detection of CAT expression site by CAT binding, fusion gene microinjection, CAT antibody detection by all-carrier immunofluorescence staining, and detection of CAT expression site by anti-ectoblast. The fusion gene domain is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the second part is divided into three parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is divided into