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遺伝子の境界・インスレーターの構造と機能の解析

基因边界和绝缘体的结构和功能分析

基本信息

批准号：
10878135
负责人：
嶋田拓
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878135/
关键词：
染色体境界ウニ胚インスレーター

项目摘要

我々はウニのアリールスルファターゼ(Ars)遺伝子上流に、エンハンサー機能を遮断する配列が存在することを発見し、その機能解析を行ってきた。その結果、Ars遺伝子上流の約600塩基対の配列は、インスレーターの条件を満たすことが示された。本研究により、Ars遺伝子インスレーターは、1:方向依存的にエンハンサー機能を遮断すること、2:Arsインスレーターはショウジョウバエにおいても、エンハンサー遮断機能を示し、同様に方向性があることが明らかになった。Ars遺伝子には強力なエンハンサーが存在し、単一コピーであるにも関わらず、Ars-mRNAは全mRNAの約0.5%にも達する。Ars遺伝子上流のインスレーターは、Ars遺伝子の影響を隣接する他の遺伝子に及ぼさなくする働きがあると予想される。外来遺伝子を染色体DNAに挿入すると、挿入位置依存的に発現が抑制されるが、3:ヒト培養HeLa細胞を用い、インスレーターで挟んだネオマイシン耐性遺伝子と挟まなかったネオマイシン耐性遺伝子を染色体DNAに導入し、安定的ネオマイシン耐性獲得効率(コロニー形成率)を指標に、Arsインスレーターの挿入位置依存的発現抑制を遮断する効果を測定しところ、Arsインスレーターを結合した場合にはコロニー形成率が顕著に増加することが示された。この結果は、Arsインスレーターの挿入位置依存的発現抑制に対する抑制効果を示唆している。また、Arsインスレーターには、4:核マトリクス結合活性があり、5:2種類の核タンパク質が結合することが示された。核タンパク質結合サイトの1つはGの連続配列(Gストリング)であり、Gストリングに結合する因子をサウスウェスタン法によりクローニングしたところ、6:GSBPは約270kDタンパク質をコードし、塩基性・酸性アミノ酸を約50%も含む新規のタンパク質であることが示された。

My 々はウニのアリールスルファターゼ(Ars)弝子上流に、エンハンサすることを発见し, その function analysis を行ってきた.その results, Ars 伝子上上のabout 600婩対の配arrayは, インスレーターのconditions を満たすことが Show された. This research is done, Ars により, Ars インスレーターは, 1: Direction-dependent にエンハンサーfunction すること, 2: Ars インスレーターはショウジョウバエにおいても、エンハンサー cover The function of the disconnection is the same as the directionality and the same directionality. Ars's strong and powerful なエンハンサーが presenceし, 単一コピーであるにも关わらず, Ars-mRNAはwhole mRNAのapproximately 0.5% にも达する. Ars弝子上流のインスレーターは、Ars缝子上流をAdjacent to するhis の伝子に and ぼさなくする働きがあると yu think される. Insertion of foreign genetic material into chromosomal DNA, Insertion position-dependent inhibition of chromosomal DNA, 3: Use of HeLa cell culture, The patient's patienceかったネオマイシンresistant legacy をchromosomal DNAにintroductionし、安Fixed ネオマイシン resistance acquisition efficiency (コロニー formation rate)を indicatorに, Arsインスレーターの insertion position-dependent appearance suppression and interruptionするeffectをmeasurementしところ、ArsインスレーターをcombinationしたOccasionally, the rate of formation is high and the rate of formation is high.このRESULTは、Arsインスレーターのinsert position-dependent 発appearance suppressionに対するsuppression effectをshows instigationしている.また, Arsインスレーターには, 4: Nuclear マトリクス binding activityがあり, 5:2 type of のタンパクquality がcombination することが Show された. Nuclear material combined with サイトの1つはGの连続array (Gストリング)であり, Gストリングにcombination factorをサウスウェスタン法によりクローニングしたところ、6:GSBPはAbout 270kD タンパク性をコードし、婩 Basic・Approximately 50% of acidic aminic acid contains む新氪のタンパク性であることが出された.