内分泌攪乱化学物質、特に有機スズによるアポトーシス誘導機構と免疫毒性発現の解析

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最近存在が明らかとなった制御性T細胞/regulatory T cell (treg)は、自己免疫疾患やアレルギーを誘発するヘルパーT細胞、Th1とTh2の活性を抑制すると考えられている。本年度は、Tregにも注目し、トリブチルスズ(TBT)によるTh1,Th2,Tregにおけるアポトーシスの感受性について比較検討を行った。BDF1マウスから樹立したTh1,Th2,Tregクローン細胞を0.1〜3.0μMのTBTで処理し、Annexin V-FITCとpropidium iodide (PI)で染色し、flow cytometerによりアポトーシスおよびネクローシスを解析した。その結果、Th2に比べ、Th1に有意にアポトーシスによる細胞死が認められた。Tregにおいては、Th1およびTh2との間に有意な差は認められなかったため、以後Th1,Th2で比較検討を行った。細胞内のグルタチオン(GSH)量を電気化学的検出器付きHPLCにて測定した結果、Th2の方がTh1に比べ有意に高かった。また、TBTによる細胞内の活性酸素種(ROS)の生成を2',7'-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)で細胞を染色しflow cytometerで解析したところ、Th1ではROSの上昇が認められたが、Th2においては逆に減少した。以上より、TBTによるアポトーシスはTh1の方がTh2に比べ感受性が高い事が明らかとなった。その理由として、Th2の方がTh1に比べGSH量が高いため、アポトーシス誘導過程で重要であるROSの生成が抑えられていることが示唆された。従って、内分泌撹乱化学物質のTBTは、Th1とTh2のアポトーシス感受性の違いによるTh1/Th2インバランスがアトピー性皮膚炎等のアレルギー疾患を誘発する可能性が考えられる。