内分泌攪乱化学物質、特に有機スズによるアポトーシス誘導機構と免疫毒性発現の解析

内分泌干​​扰物尤其是有机锡诱导细胞凋亡机制及免疫毒性表达分析

• 批准号: 01J06979
• 负责人: 及川 佐枝子 (多田 佐枝子)
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J06979/
• 关键词: 内分泌撹乱化学物質; トリブチルスズ; アポトーシス; 免疫毒性; Th1; Th2インバランス; GSH; Treg; Treg細胞

最近存在が明らかとなった制御性T細胞/regulatory T cell (treg)は、自己免疫疾患やアレルギーを誘発するヘルパーT細胞、Th1とTh2の活性を抑制すると考えられている。本年度は、Tregにも注目し、トリブチルスズ(TBT)によるTh1,Th2,Tregにおけるアポトーシスの感受性について比較検討を行った。BDF1マウスから樹立したTh1,Th2,Tregクローン細胞を0.1〜3.0μMのTBTで処理し、Annexin V-FITCとpropidium iodide (PI)で染色し、flow cytometerによりアポトーシスおよびネクローシスを解析した。その結果、Th2に比べ、Th1に有意にアポトーシスによる細胞死が認められた。Tregにおいては、Th1およびTh2との間に有意な差は認められなかったため、以後Th1,Th2で比較検討を行った。細胞内のグルタチオン(GSH)量を電気化学的検出器付きHPLCにて測定した結果、Th2の方がTh1に比べ有意に高かった。また、TBTによる細胞内の活性酸素種(ROS)の生成を2',7'-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)で細胞を染色しflow cytometerで解析したところ、Th1ではROSの上昇が認められたが、Th2においては逆に減少した。以上より、TBTによるアポトーシスはTh1の方がTh2に比べ感受性が高い事が明らかとなった。その理由として、Th2の方がTh1に比べGSH量が高いため、アポトーシス誘導過程で重要であるROSの生成が抑えられていることが示唆された。従って、内分泌撹乱化学物質のTBTは、Th1とTh2のアポトーシス感受性の違いによるTh1/Th2インバランスがアトピー性皮膚炎等のアレルギー疾患を誘発する可能性が考えられる。

Recently, there have been studies on the inhibition of T cell/regulatory T cell (treg) activity, Th1 and Th2 activity, and the induction of autoimmune diseases. This year, the Treg Center for Research (TBT) has conducted a comparative study on Th1, Th2,Treg Center for Research and Development (TBT) sensitivity. BDF1,Th2,Treg cells were treated with 0.1 ~ 3.0μM TBT, Annexin V-FITC and propidium iodide (PI), and analyzed by flow cytometer. The results, Th2, Th1 and Th3 are not the same. Treg, Th1 Th2 The amount of intracellular GSH was determined by electrochemical detector and HPLC, and the ratio of Th2 to Th1 was intentionally higher than that of Th1. The production of reactive acid species (ROS) in the cells due to TBT and DCFH-DA was analyzed by flow cytometer. The increase of ROS in Th1 and Th2 cells was observed and the decrease of ROS in Th2 cells was observed. The above is the case with TBT. The reason for this is that Th2 is higher than Th1 in GSH, and ROS generation is more important than induction. TBT, Th1/Th2, Th2/Th3, Th1/Th2, Th2/Th3, Th1/Th2, Th1/Th2, Th2/Th3, Th1/Th2, Th1/Th2, Th2/Th3, Th1/Th2, Th2/Th2, Th1/Th2, Th2/Th2, Th1/Th2, Th

项目成果

Nakashima, S: "Vacuolar H+-ATPase inhibitor induces apoptosis via lysosomal dysfunction in the human gastric cancer cell line MKN-1."The Journal of Biochemistry. 134巻3号. 359-364 (2003)

Nakashima, S：“液泡 H+-ATP 酶抑制剂通过人胃癌细胞系 MKN-1 中的溶酶体功能障碍诱导细胞凋亡。”《生物化学杂志》第 134 卷，第 3 期。359-364 (2003)

Tada-Oikawa, S: "Mechanism for generation of hydrogen peroxide and change of mitochondrial membrane potential during rotenone-induced apoptosis."Life Sciences. 73巻25号. 3277-3288 (2003)

Tada-Oikawa, S：“鱼藤酮诱导的细胞凋亡过程中过氧化氢的产生和线粒体膜电位的变化。”第 73 卷，第 25 期。3277-3288 (2003)。

Kato, T: "Environmental pollutant Tributyltin promotes Th2 polarization and exacerbates airway inflammation."European Journal of Immunology. (in press). (2004)

Kato, T：“环境污染物三丁基锡促进 Th2 极化并加剧气道炎症。”欧洲免疫学杂志。

Mizutani H.: "Mechanism of Apoptosis Induced by a New Topoisomerase Inhibitor through the Generation of Hydrogen Peroxide"Journal of Biological Chemistry. 277巻34号. 30684-30689 (2002)

Mizutani H.：“新型拓扑异构酶抑制剂通过产生过氧化氢诱导细胞凋亡的机制”，生物化学杂志，第 277 卷，第 34 期。30684-30689 (2002)

Kawanishi M.: "Epstein-Barr virus BHRF1 functions downstream of Bid cleavage and upstream of mitochondrial dysfunction to inhibit TRAIL-induced apoptosis in BJAB cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. 297巻3号. 682-687 (2002)

Kawanishi M.：“Epstein-Barr 病毒 BHRF1 在 Bid 裂解下游和线粒体功能障碍上游发挥作用，抑制 BJAB 细胞中 TRAIL 诱导的细胞凋亡”《生物化学和生物物理研究通讯》第 297 卷，第 3. 682-687 期（2002 年）。