ユビキチンリガーゼによる細胞癌化機構の解析

泛素连接酶分析细胞癌变机制

• 批准号: 01J10739
• 负责人: 中川 宏治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J10739/
• 关键词: ユビキチン; SUMO-1; PIAS; 翻訳後修飾; 転写制御; 癌遺伝子・癌抑制遺伝子

昨年度、癌抑制因子IRF-1の結合タンパク質として同定した、ユビキチン様タンパク質SUMO-1のリガーゼ(E3酵素)であるPILAS3についてその機能解析を行った。初めに、動物細胞中におけるPIAS3とIRF-1の結合を確認し、PIAS3のdeletion mutantを用いてPIAS3上のIRF-1結合ドメインを同定した。次に、293T細胞を用いた強制発現系の実験から、PIAS3依存的にIRF-1がSUMO-1化修飾されることを見出した。これらの結果から、PIAS3はUBC9とIRF-1の相互作用を増強することにより、IRF-1のSUMO-1化修飾を促進していることが明らかとなった。また、PIAS3によるIRF-1の転写活性に対する影響をluciferase assayにより解析した結果、PIAS3はSUMO-1リガーゼ活性依存的にIRF-1の転写活性を抑制した。以上の結果からPIAS3はSUMO-1リガーゼであり、IRF-1のSUMO-1化修飾を促進することにより、転写活性を負に制御していると結論した(FEBS lett 530,204-208,2002)。次に、PIASタンパク質の生理的機能についてさらに解析を進める目的でyeast two-hybrid法を用いてPIAS結合タンパク質を探索した。その結果、PIAS1結合タンパク質として、DNA損傷チェックポイントの制御因子であり、癌抑制因子として機能するChk2(check point kinase2)を同定した。293T細胞における強制発現系の実験から、PIAS1がChk2のSUMO-1化修飾を促進ことが判明した。これらの結果から、Chk2はSUMO-1リガーゼPIAS1の新規の基質であることが明らかとなった(投稿準備中)。

Last year, the combination of cancer suppressor factor IRF-1 and タンパク性として同定した、ユビキチン様タンパク性SUMO-1のリガーゼ(E3 enzyme)であるPILAS3についてそのfunctional analysisを行った. Confirmation of binding of PIAS3 and IRF-1 in animal cells at the beginning, confirmation of binding of PIAS3 to IRF-1 in animal cells, determination of binding of IRF-1 to PIAS3 in PIAS3 mutant. In this case, 293T cells were modified with いた forced expression system and PIAS3-dependent にIRF-1 and SUMO-1 chemical modification. The result of the interaction between PIAS3 and UBC9 and IRF-1 has been strengthenedにより、IRF-1のSUMO-1 chemical modification をpromoting していることが明らかとなった.また, PIAS3 によるIRF-1 の転 active に対する affects をluciferase The results of the assay analysis showed that the PIAS3 SUMO-1 activity was dependent on the activity of IRF-1 and the activity was inhibited. The above results are PIAS3はSUMO-1リガーゼであり、IRF-1のSUMO- 1 chemical modification, promotion, activation, negative control, conclusion (FEBS) lett 530,204-208,2002). The physiological functions of PIAS and PIAS are analyzed and analyzed, and the purpose of PIAS is to explore the two-hybrid method using PIAS combined with PIAS.その results, PIAS1 binding タンパクquality として, DNA damage チェックポイントの control factor であり, cancer suppressor factor としてfunction するChk2 (check point kinase2)を同定した. The 293T cells are forced to show the current system and the SUMO-1 chemical modification of PIAS1 and Chk2 is promoted and the results are clear.これらのRESULTSから、Chk2はSUMO-1リガーゼPIAS1の新guiのstroma であることが明らかとなった (preparing for submission).

项目成果

Koji Nakagawa: "PIAS3 induces SUMO-1 modification and transcriptional repression of IRF-1"FEBS Letters. 530. 204-208 (2002)

Koji Nakakawa：“PIAS3 诱导 SUMO-1 修饰和 IRF-1 转录抑制”FEBS Letters。