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新規セリン・スレオニンキナーゼLATS2による細胞増殖制御機構の解明

新型丝氨酸-苏氨酸激酶LATS2阐明细胞增殖控制机制

基本信息

批准号：
01J60030
负责人：
阿部芳憲
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60030/
关键词：
セリン・スレオニンキナーゼ M期中心体 LIMタンパク質

项目摘要

前年度までにLATS2キナーゼをベイトとした、Yeast Two-HybridスクリーニングによるLATS2キナーゼ結合蛋白質の探索を行い、LIM蛋白質Ajubaを同定した。そしてLATS2キナーゼとAjubaはM期で結合が亢進すること、LATS2キナーゼ、Ajubaともに中心体にも局在することなどの知見を得た。本年度はLATS2キナーゼおよびAjubaのM期における生理的役割を明らかにする目的で、HeLa細胞を用いたRNAiを行った。LATS2キナーゼおよびAjubaの発現抑制によるM期への影響を観察するために次の操作を行った。チミジンによる最初のS期同調完了後にsiRNAをトランスフェクションした。その後ヒドロキシウレアによる2回目のS期同調を行った。この操作により、S期同調後に訪れる最初のM期で、LATS2キナーゼないしAjubaの発現が抑制される細胞を得ることができる。その時のM期の細胞をγ-チューブリンおよびα-チューブリンに対する特異抗体を用いた免疫染色により観察した。その結果LATS2キナーゼ、Ajubaの発現抑制は、共に紡錘体形成異常が原因と思われる細胞分裂の異常を引き起こした。この結果とLATS2キナーゼおよびAjubaが中心体およびmidbodyに局在するという結果から、LATS2キナーゼとAjubaはM期において会合し、M期進行における中心体の機能や紡錘体形成や染色体分配に重要な役割を果たすことが考えられた。

In the previous year, LATS2 proteins were linked to LATS2 proteins in the same way as LIM protein Ajuba in the previous year. The combination of LATS2, LATS2, and Ajubathing centrosome information was reported in the hospital during the Ajuba period. In this year's LATS2 program, the RNAi of physiology is clear and RNAi is used in this year's work. LATS2 is required. Ajuba has been suppressed. During this period, you will be able to observe the operation. After the initial period of S is the same as the end of the siRNA period, please tell me that you are in the same period. After that, you will be back in the same period as you would like to see. In the first phase of the operation, the S phase is the same as the later phase, and the initial M phase, the LATS2 phase, the Ajuba cell, the cell cycle, the cell size, the number of cells, and so on. The specific antibodies were detected by immuno-immunostaining assay. The results showed that the inhibition of LATS2, Ajuba and the formation of symbiosis were caused by cell mitosis. Results during the LATS2 cycle, the centrosome of the Ajuba, the centrosome, the midbody, the LATS2, the Ajuba, the M phase, the central body, the body, the chromosome, the chromosomes, the chromosomes, the chromosomes,