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シアノバクテリア信号伝達タンパク質の分子アーキテクチャー

蓝藻信号蛋白的分子结构

基本信息

批准号：
12019211
负责人：
大森正之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シアノバクテリアにおけるゲノム解析は、すでに3種類のラン藻において塩基配列がほぼ決定された。全ゲノム解析の次の段階として、全タンパク質の構造解析と機能解析が期待される。構造が未知のタンパク質については、既知のタンパク質のX線解析データを基にアミノ酸配列の相同性からコンピューターによる構造予測が可能である。我々は、CyaGの触媒部位をGSTとの融合タンパク質として大腸菌で大量発現させ、アフィニテイークロマトグラフィー、ゲル濾過などの方法によってタンパク質の精製した。次に触媒部位の3つのアミノ酸を置換した変異体を作り、ATP,GTPを基質として酵素活性を測定したところ、変異体はアデニル酸シクラーゼではなくグアニル酸シクラーゼを合成していることが明らかとなった。アミノ酸を置換した触媒部位と置換する前の触媒部位について、ホモロジーモデリングにより、基質との結合の構造予測を行ったところ、アミノ酸置換によって基質特異性が変化したことが確認された。一方、cAMP分解酵素であるcAMPホスホジエステラーゼに関しては、活性の存在は報告されているものの遺伝子の構造や活性調節機構についても全く不明であった。我々は、大腸菌のcAMPホスホジエステラーゼ遺伝子cpdAと相同性を持つorfを見つけた。大腸菌においてこのorfを(His)x6タグ融合タンパク質として発現させ、精製を行った。この精製タンパク質はcAMP分解活性を示した。そこで大腸菌のホスホジエステラーゼをモデルとしてこの酵素の構造を予測した

For example, if you want to use a computer, you can use it to analyze the three types of computers. All kinds of structural analysis and functional analysis are expected. Structure prediction is possible on the basis of X-ray analysis of the unknown and known properties of the structure. The catalyst site of CyaG is fused with GST and purified by Escherichia coli in large quantities. The activity of enzymes in the catalytic sites was determined by the substitution of different acids by ATP,GTP and the synthesis of different acids. The structure prediction of the binding of the substrate and the catalyst site before the acid substitution is carried out. One side, cAMP catabolic enzyme, cAMP, cAMP I am not interested in E. coli cAMP. E. coli is the most common form of bacteria. The activity of cAMP decomposition was demonstrated in the purified protein. The structure of E. coli is predicted.