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cAMPシグナルカスケードによる光環境応答の分子機構

cAMP信号级联响应光环境的分子机制

基本信息

批准号：
05266207
负责人：
大森正之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

改変デトマー培地で培養したAnabaena cylindricaの細胞を遠心により集め、常法に従って抽出したgenomicDNAを用い、クローニングベクターとしてpBR322を利用し、independent clone(1x10^4)、平均insert長9.3kbのライブラリを作製した。このライブラリを用い遺伝子導入したE.coliのMK1010株(アデニル酸シクラーゼ欠損株)の形質転換体より、一個のcya^-のマルトース発酵を相補する形質転換体を得た。この形質転換体より回収したプラスミドクローンpAC1を導入したcya^-のE.coliは多量のcAMPを含んでいることがわかった。pAC1の制限酵素切断断片地図と、それぞれの切断断片をcya^-のE.coliに導入したときのマルトース発酵能の検索から、マルトース発酵能を回復させる領域1.8kbを同定し、塩基配列の決定を行った。この領域には1,506bp、502アミノ酸残基からなるタンパク質をコードするオープンリーディングフレームが見い出された。このオープンリーディングフレームのアミノ酸配列のC末端側は、根粒菌(Rhizobium meliloti)、ラットのタイプIII型、ショウジョウバエのアデニル酸シクラーゼ、ウニ、ラット、マウス、ヒトのグアニル酸シクラーゼの触媒領域と相同性があることがわかった。また、構成アミノ酸から予想される疎水性の度合いについて検討した結果、この酵素には膜を貫通する領域があることが推定された。A.cylindricaのアデニル酸シクラーゼには、タンパク質のN末端および中央付近に疎水性アミノ酸からなる配列が2箇所存在しており、1次構造上から膜タンパク質であることが示された。この酵素は、中央で膜を1回貫通した、いわゆる受容体型の膜タンパク質であることが予測された。ラン藻のアデニル酸シクラーゼが、原核生物よりは、真核生物型に近い構造を示すことから、ラン藻にも真核生物に類似したcAMP依存性信号応答機構が存在する可能性が示された。

Change the soil and cultivate the ground Anabaena cylindrica's cell を telecentric によりassemble め, often method に従って extracted したgenomicDNA を use い, クローニングベクターとしてpBR322 をutilization し, independent clone(1x10^4), the average insert length is 9.3kb, produced by のライブラリを.このライブラリを was introduced into したE.coliのMK1010 strain (アデニル acid シクラーゼDeficient strain) のmorphological quality change body より, a のcya^-のマルトース発zyme complement each other するmorphological quality change body をgetた.この色転転体よりRECALL したプラスミドクローンpAC1をImport したc ya^-のE.coliは多のcAMPをcontainsんでいることがわかった. pAC1's restriction enzyme cut fragments 図と, それぞれの cut fragments をcya^-のE.coliに imported したときのマルトース発発能の検SOから, マルトース発発能をRESTORY させる domain 1.8kb を同定し, 桩 Basic arrangement のdetermination を行った.この区には1,506bp, 502アミノ acid residue からなるタンパク性をコードするオープンリーディングフレームが见い出された. Rhizobium meliloti), ラットのタイプType III, ショウジョウバエのアデニル acid シクラーゼ, ウニ, ラット, マウス, ヒトのグアニル acid シクラーゼのcatalyst field とidentity があることがわかった.また、Constitute a アミノ acid から yu want to される疎 Water-based の度合いについて検 Discussion しAs a result, it is estimated that the enzyme film has penetrated the field. A. cylindrica のアデニル acid シクラーゼには, タンパク性のN-terminal およびcentral pay near に疎水The nature of the アミノ acid からなる arrangement が2箇 exists しており, and the から film タンパクquality であることがshows された on the primary structure.このzyme は, central でmembrane を1-pass through した, いわゆるacceptable type のmembrane タンパクquality であることがpredicted された.ランのアデニル acid シクラーゼが, prokaryotes よりは, eukaryote type にNearly いstructure をshow すことからThe possibility of the existence of similar cAMP-dependent signal response mechanisms in eukaryotic organisms has been shown.