核膜融合に必須な分子シャペロンJemlpと相互作用する核膜タンパク質の機能解析

与核膜融合所必需的分子伴侣 Jemlp 相互作用的核膜蛋白的功能分析

• 批准号: 12680690
• 负责人: 西川 周一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12680690/
• 关键词: 核膜融合; 分子シャペロン; スピンドル極体; 核分裂

本研究では,出芽酵母小胞体の分子シャペロンJem1pと相互作用する,出芽酵母の新規核膜タンパク質Nep98pの機能解析を目的として研究を行なっている.本年度は,Nep98pの機能および機能領域の解析を行なった.遺伝子破壊実験によって,Nep98pの機能が酵母の増殖に必須であることが示されている.そこでNep98pの機能する過程を明らかにするため,Nep98pに関する温度感受性変異株の作製を行なった.得られた温度感受性変異株を制限温度にシフトすると,G2/M期に対応する細胞の割合が増加した.また,そのような細胞中では核分裂の進行に欠損が観察され,抗チューブリン抗体を用いた蛍光抗体法によって,スピンドル形態に異常を示すことが明らかとなった.電子顕微鏡を用いた解析から,nep98温度感受性変異株ではスピンドル極体の構造に異常を持つことが明らかとなった.以上の結果から,Nep98pはスピンドル極体の機能発現に必須な役割をはたしていると考えられる.スピンドル極体の機能は,酵母接合時の核融合にも必要であり,nep98温度感受性変異株の接合子は2つの1倍体核の接近と核外膜の融合の過程に欠損を示すことが明らかとなった.Nep98pは膜貫通領域を1つ持つ膜内在性タンパク質であり,N末端をサイトゾル側に向けたトポロジーをとる.また,C末端側にはJem1pとの相互作用領域が存在する.これらの領域の機能を明らかにするため,様々なNep98pの部分欠失変異株を作製した.この結果,Jem1pとの相互作用領域は酵母の増殖に必須であり,ここがわずかでも欠失すると酵母は致死となることが明らかとなった.また,N末端のサイトゾル側ドメインは酵母の増殖に必須ではなかったが,接合時の核融合およびNep98pの核膜局在に必要であることが示された.

The purpose of this study was to elucidate the molecular interaction of the budding yeast minicell and the function of the new nuclear membrane protein Nep98p in budding yeast. This year,Nep98p's functional and functional areas of analysis. Nep98p functions as an essential component of yeast growth. Nep 98p is a functional plant that is sensitive to temperature and operates under different conditions. The temperature sensitivity of the mutant plants is controlled by the temperature, and the cell fusion in the G2/M phase increases. In addition, in the cell, the progress of nuclear division is not detected, and the anti-nuclear antibody is detected by the light antibody method, and the morphological abnormality is detected. The electron microscope is used to analyze the temperature sensitivity of nep98. As a result, the Nep98p has to be cut off to realize its function. The function of the N-terminal is necessary for nuclear fusion during yeast conjugation. The N-terminal of the N-terminal. The interaction domain of Jem1p on the C-terminal side exists. The function of this domain is clear, and some of the missing parts of Nep98p are controlled. As a result, the interaction domain of Jem1p is necessary for yeast growth. The N-terminal region of yeast must be fused to the nuclear membrane of Nep98p during conjugation.

项目成果

中務邦雄: "Mnllp, an α-mannosidase-like protein in yeast, Saccharomyces cerevisiae, is required for ER associated degradation of glycoproteins"The Journal of Biological Chemistry. (in press). (2001)

Kunio Nakatsuka：“Mnllp，一种酿酒酵母中的 α-甘露糖苷酶样蛋白，是与 ER 相关的糖蛋白降解所必需的”《生物化学杂志》（2001 年出版）。